多克隆抗體和單克隆抗體之間的主要區(qū)別及應(yīng)用

什么是單克隆抗體？

單克隆抗體定義：

與靶抗原上的特定表位結(jié)合的一種（單一）抗體構(gòu)成單克隆抗體。

單克隆抗體生產(chǎn)

為了產(chǎn)生單克隆抗體，是將免疫原注射到宿主動(dòng)物中。一旦免疫原引起免疫反應(yīng)，脾臟中的 B 細(xì)胞就會(huì)被提取出來并與骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞 B 細(xì)胞）融合。

健康的脾細(xì)胞不會(huì)在細(xì)胞培養(yǎng)中無限期地存活，因此進(jìn)行此融合過程以制造永生細(xì)胞系。通過該過程產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞系。

通過將脾臟中的單個(gè) B 細(xì)胞融合并培養(yǎng)到它們自己的雜交瘤中，產(chǎn)生了所有產(chǎn)生相同特異性抗體的 B 細(xì)胞的單一培養(yǎng)物。

B 細(xì)胞將單克隆抗體分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基中。在這里，它們被提取出來進(jìn)行進(jìn)一步的測(cè)試和純化。

單克隆抗體雜交瘤克隆的產(chǎn)生提供了穩(wěn)定的可再生抗體來源，確保每批與前一批相同。

為了產(chǎn)生一種分泌富含抗體的液體（稱為腹水）的腫瘤，也可以將雜交瘤注射到小鼠的腹腔中。

單克隆抗體的用途：

• 檢測(cè)特定抗原
• 檢測(cè)蛋白質(zhì)家族的單個(gè)成員
• 在實(shí)驗(yàn)/批次之間創(chuàng)建一致的結(jié)果
• 對(duì)背景較少的細(xì)胞進(jìn)行染色——非常適合免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)
• 量化蛋白質(zhì)表達(dá)（例如流式細(xì)胞術(shù)或熒光激活細(xì)胞分選）
• 檢測(cè)分子構(gòu)象的變化
• 檢測(cè)磷酸化狀態(tài)的變化
• 檢測(cè) X 射線晶體學(xué)的目標(biāo)
• 創(chuàng)建缺少特定細(xì)胞類型的動(dòng)物模型
• 免疫療法

單克隆抗體不適用于：

• 基于同源性檢測(cè)跨物種的靶蛋白
• 檢測(cè)低水平的目標(biāo)蛋白
• 檢測(cè)構(gòu)象改變的蛋白質(zhì)

什么是多克隆抗體？

多克隆抗體定義：

與靶抗原上許多不同表位結(jié)合的許多（多）不同抗體構(gòu)成多克隆抗體。

多克隆抗體生產(chǎn)

將免疫原注射到宿主動(dòng)物體內(nèi)以產(chǎn)生多克隆抗體。動(dòng)物中的免疫反應(yīng)是由這種免疫原激活多個(gè) B 細(xì)胞引起的，所有這些 B 細(xì)胞都針對(duì)免疫原上的特定表位。

大量具有不同互補(bǔ)位的抗體由此產(chǎn)生，因此對(duì)靶蛋白的親和力不同。

 免疫后，可以直接從血清（去除凝血蛋白和紅細(xì)胞的血液）中使用這些多克隆抗體，或者將它們純化以獲得不含其他血清蛋白的溶液。

必須用抗原對(duì)新動(dòng)物進(jìn)行免疫以創(chuàng)建新批次，這意味著批次之間存在高度的可變性。

多克隆抗體的用途：

• 檢測(cè)具有高抗原同源性的已知或未知抗原亞型
• 檢測(cè)低水平的特定抗原
• 盡可能多地捕獲抗原（例如免疫沉淀或染色質(zhì)免疫沉淀）
• 檢測(cè)變性蛋白質(zhì)
• 檢測(cè)具有可能的遺傳多態(tài)性、糖基化或構(gòu)象變化的靶標(biāo)
• 跨多種檢測(cè)類型檢測(cè)天然蛋白質(zhì)
• 在不同 pH 值和鹽濃度的溶液中檢測(cè)目標(biāo)

多克隆抗體不適用于以下領(lǐng)域：

• 定量實(shí)驗(yàn)，例如流式細(xì)胞儀，由于多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)導(dǎo)致信號(hào)放大，會(huì)導(dǎo)致不正確的結(jié)果
• 與高同源蛋白存在交叉反應(yīng)問題的情況

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