分光光度計和酶標儀都是光檢測儀器,實驗室中主要用來測定實驗樣本的吸光度,雖然它們的功用基本相同,但是兩者還是有很大差別的。
其主要差異主要有以下幾點:
一、檢測波長范圍的不同
分光光度計雖與酶標儀一樣都使用朗伯-比耳定律進行吸光度測定,但它們的可測光在波長范圍上是有所區(qū)別。分光光度計主要分為三種:
紫外分光光度計:主要測定波長范圍為200-380nm的紫外光區(qū).
可見光分光光度計(或比色計):主要測量波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)。
熒光分光光度計:主要用于液體、凝膠類的光譜掃描。激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
紅外分光光度計或原子吸收分光光度計適合用于測定2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。
普通的酶標儀主要通過濾光片來激發(fā)光源形成特定的波長.在濾光片輪中使用不同的濾光片可獲得不同長度的波長,但波長范圍相對較窄。另外酶標儀具有較強紫外吸收能力,所以在300nm以下波長光區(qū)不建議使用酶標儀進行含量測定。
二、檢測效率不同
酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀是采用48孔或96孔酶標板即微孔板作為樣本容器,可以盛裝不同的樣本以同時測定吸光度,并能快速地進行吸光度對比。而分光光度計采用的是盛樣器皿為比色皿,每次只能測定一種溶液樣本,這樣增加了實驗的重復性,同樣也增加了樣本及試劑的使用量,測定效率也遠遠低于酶標儀。
三、 光路的方向的不同
由于根據(jù)測定樣本方式的不同,兩者的光路設計也不相同。分光光度計采用的水平光路設計,也就是光線水平通過樣本和比色皿,其測定結果不會受到垂直方向因素影響。酶標儀所采用的是垂直光路設計,這樣光線可以一次通過所有待測孔。但它的缺點在于容易受到樣本溶液液面平整度、待測樣本濃度、微孔板的通透性能等因素影響而造成實驗數(shù)據(jù)偏差。
四、光路的長度的不同:
由于樣本的吸光系數(shù)與樣本濃度、光路長度及OD值成正比例關系。所以光路的長度也會影響到吸光率。在分光光度計中,由于其光路是水平的,光路長度近似于比色皿的寬度,一般為1厘米左右。而酶標儀的光路長度則取決于樣本溶液的液面高度,這就要保證每個孔內的液面高度要一致,如果樣本液面的高度參差不齊,也會直接影響實驗結果的準確度。
由此可見,吸光度的測定需要根據(jù)不同的實驗內容去選擇對應的儀器設備,有效地揚長避短,這樣才能較大程度發(fā)揮儀器的功用,從而提高實驗效率和準確的實驗結果。
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