胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)常用的生物試劑,那么用不完的胎牛血清FBS該如何儲(chǔ)存呢?
胎牛血清FBS 一般需要冷凍保存,在 -5 到 -20°C 之間,并且可以在 2 到 8°C 的溫度下解凍。將血清等分并冷凍在較小的部分(通常為 50 ml 試管)中通常很有用,以避免多次冷凍和解凍循環(huán)。有時(shí),一些 FBS 等分試樣在冷凍溫度下仍保留在液體中。這是由于缺乏用于開(kāi)始結(jié)晶(冷凍)的成核中心(顆粒物質(zhì))。如果您只是用手指輕彈管子,它們通常幾乎會(huì)立即凝固。解凍后有一些沉淀是很常見(jiàn)的。沉淀物,可能是由于某些血清蛋白的變性,可以通過(guò)短暫的離心來(lái)清除,這通常不會(huì)影響血清的質(zhì)量。
胎牛血清的處理方法主要有以下幾種:
1.熱滅活
FBS 的常見(jiàn)處理方法是熱滅活,其中將 FBS 在 56°C 的水浴中加熱 30 分鐘,偶爾搖晃。目的是滅活 FBS中存在的補(bǔ)體系統(tǒng)的任何成分,以及其他潛在的未知細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑。以前熱滅活也是為了去除支原體污染,這不再是一個(gè)問(wèn)題,因?yàn)楝F(xiàn)在所有的血清產(chǎn)品都通過(guò)小到足以去除支原體的孔徑進(jìn)行過(guò)濾。必須注意的是,熱滅活也可能產(chǎn)生不良影響,例如降低培養(yǎng)細(xì)胞附著在表面上的能力。熱滅活過(guò)程必須小心進(jìn)行,因?yàn)闇囟冗^(guò)高或長(zhǎng)時(shí)間加熱會(huì)使生長(zhǎng)因子失活,并產(chǎn)生沉淀物。
2.活性炭處理
活性炭可以與親脂性分子結(jié)合,因此已用于從 FBS 中去除激素,例如雄激素、雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮、三碘甲狀腺原氨酸 (T3) 和甲狀腺素 (T4)。這些血清脂質(zhì)激素傾向于干擾免疫測(cè)定系統(tǒng)和胰島素測(cè)定方法。
3.透析
透析可以從 FBS 中去除所有分子量小于 10,000 MW 的分子。這包括極性和非極性分子。去除激素、細(xì)胞因子、葡萄糖、氨基酸和許多其他物質(zhì)。透析還可以去除 FBS 中的抗生素和其他外源性分子。
4.伽馬輻照
伽馬輻照可以是 FBS 滅菌過(guò)程的一部分。FBS 通常通過(guò) 0.1 um 過(guò)濾器多次過(guò)濾,以消除微生物。伽馬射線照射可以滅活牛類中常見(jiàn)的病毒。然而,一些病毒種類,例如細(xì)小病毒,對(duì)伽馬射線照射具有抗性。
5.低 IgG
盡管 FBS 的 IgG 含量較低,但對(duì)于某些特定應(yīng)用來(lái)說(shuō),即使這個(gè)水平也可能過(guò)高。通過(guò)捕獲色譜法可以進(jìn)一步顯著降低 IgG 水平。具有低 IgG 的 FBS 用于抗體生產(chǎn)、重組蛋白合成和其他應(yīng)用。
FBS主要產(chǎn)自于哪里?
胎牛血清的產(chǎn)地主要集中于美、澳大利亞、新西蘭、加拿大,以及南美洲和中美洲等地區(qū),血清產(chǎn)品的生產(chǎn)和收集均受指機(jī)構(gòu)管理。FBS通常被標(biāo)記為 USDA 級(jí)或歐洲級(jí)。
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