RNA提取和DNA提取 實驗在分子生物學(xué)中比較常用，但有時會出現(xiàn)產(chǎn)量低、純度低、易降解等情況，下面就實驗中常見問題及實驗過程中的注意事項做以匯總：

一、RNA提取和DNA提取實驗中常見問題

1.產(chǎn)量低

如果您遇到的 DNA/RNA 產(chǎn)量低于您對樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個裂解問題。不完全裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優(yōu)質(zhì)乙醇（100% 200 標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的 DNA 或 RNA 。

2.低純度

如果提取的 DNA 被蛋白質(zhì)污染（低 260/280），那么您可能開始時樣品過多，而蛋白質(zhì)沒有完全去除或溶解。

如果 DNA 的 260/230 比率不佳，則問題通常是結(jié)合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用最高質(zhì)量的乙醇來制備洗滌緩沖液，如果問題仍然存在，請再次洗滌色譜柱。

與其他樣品相比，一些樣品含有更多的抑制劑。環(huán)境樣品特別容易出現(xiàn)純度問題，因為腐殖質(zhì)在提取過程中會被溶解。

腐殖質(zhì)的行為與 DNA 相似，很難從硅膠柱中去除。

3.降解

降解問題是RNA制備中常常到的問題。因為在 RNA 提取過程中，樣品儲存不當(dāng)或裂解效率低等情況都會導(dǎo)致降解。 對于 DNA 提取，降解不是一個大問題，因為對于 PCR，DNA 可以被剪切并且工作正常，如果 不希望有較多剪切的 DNA，可以使用弱裂解的方法。

二、PCR 清理時的注意事項

PCR 凈化其實并不是 DNA 提取技術(shù)本身，但它是一種效率高且簡單的技術(shù)，它只是添加高濃度的結(jié)合鹽（通常每體積 PCR 反應(yīng) 3-5 體積鹽）和離心來過濾。

在實驗過程中，PCR Clean-up 試劑盒出現(xiàn)故障也會導(dǎo)致整個實驗功虧一簣。

因為在PCR 反應(yīng)中有較多吸收 260 度紫外線的物質(zhì)，比如：核苷酸、去污劑、鹽和引物。所以，PCR 凈化試劑盒經(jīng)常無法正常工作可能是由于 PCR 反應(yīng)失敗所造一般成較難清理。

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