使用流式細胞儀進行細胞分析的流式細胞術廣泛用于分析細胞表面和細胞內(nèi)分子的表達、鑒定并確定異質(zhì)細胞群中的不同細胞類型、評估分離亞群的純度以及分析細胞大小和容積。

   主要用于測定熒光標記的抗體檢測蛋白產(chǎn)生的熒光強度，或結合了特定細胞分子的配體，如碘化丙啶與 DNA 的結合。

其染色過程包括從細胞培養(yǎng)物或組織樣品制備單細胞懸液。然后將獲得的細胞培養(yǎng)在包含未標記或熒光標記抗體的試管或多孔板中，再用流式細胞儀分析。

流式細胞儀主要有兩型：

小型機和綜合型。除具備檢測分析功能外，還具有細胞分選功能，多用于科學研究。

流式細胞儀主要技術指標：

1.流式細胞儀的分析速度：

一般流式細胞儀每秒檢測1000～5000個細胞，大型機可達每秒上萬個細胞；

2.式細胞儀的熒光檢測靈敏度：

一般能測出單個細胞上<600個熒光分子，兩個細胞間的熒光差＞5%即可區(qū)分；

3.前向角散射（FSC）光檢測靈敏度：

前向角散射（FSC）反映被測細胞的大小，一般流式細胞儀能夠測量到0.2μm ～0.5μm；

4.流式細胞儀的分辨率：

通常用變異系數(shù)CV值來表示，一般流式細胞儀能夠達到<2.0%，這也是測量標本前用熒光微球調(diào)整儀器時要求必須達到的；

5.流式細胞儀的分選速度：

一般流式細胞儀分選速度＞1000個/秒，分選細胞純度可達99% 以上；

細胞內(nèi)染色：

用于流式細胞術的細胞內(nèi)抗原染色方案取決于可讓抗體接近內(nèi)部細胞蛋白的固定和透化方法。無論何種情況，成功的染色都離不開通過抗體滴定進行的實驗條件優(yōu)化、使用適合的對照正確設置流式細胞儀以及優(yōu)化的固定和透化步驟。

分泌蛋白的檢測：

分泌蛋白的檢測十分困難，因為蛋白會在檢測前從細胞中釋放出來且可能快速降解。高爾基體阻斷劑（如布雷非德菌素A）可用于抑制表達蛋白的分泌，使其仍保留在高爾基體中。然后再用細胞內(nèi)染色法檢測靶標蛋白。

熒光染料偶聯(lián)劑的選擇

給定的抗體能否從陰性信號中分辨陽性信號取決于所用的熒光染料偶聯(lián)劑。

   各熒光染料的相對強度一般指導原則是，從亮到暗依次為：PE、PE-Cy 7、PE-Cy5 、APC、APC-Cy7、Alexa Fluor 647?、 Alexa Fluor 700?、FITC、Pacific Blue 和 Alexa Fluor 488?。這是一般排序，個別抗體的相對強度可能有所差異。

    高度表達的抗原通?？杀粰z測且與陰性對照區(qū)分開來，無論使用何種熒光染料。表達較少的抗原需要較亮的 PE 或 APC 偶聯(lián)劑提供的高信號背景比，以將陽性細胞完全從未染色的細胞中區(qū)分開來。

在流式細胞儀中，Cv值（即變異系數(shù)）的高低反映了實驗數(shù)據(jù)的離散程度。通常情況下，較低的Cv值表示實驗結果的可靠性更高。

     蘇州阿爾法生物提供的進口muse流式細胞儀、 GuavaregMuereg細胞分析儀， ImageStream?X MkII成像 流式細胞分析儀是將 流式 細胞儀的高檢測速度、高靈敏度以及表型分析能力與顯微鏡的高分辨圖像及功能性研究完美結合。ImageStreamX MkII系統(tǒng)屬于臺式多色成像流式細胞儀 ，可采集多達12個通道的細胞圖像。

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