PH源自“pondus hydrogenii”或“potentia hydrogenii”。兩者剛開始都是拉丁語(yǔ)短語(yǔ),“pondus hydrogenii”意思是“氫的重量”,“potentia hydrogenii”意思是“氫的力量”。pH 值是衡量水溶液酸性或堿性程度的無(wú)量綱數(shù)。PH值是指溶液的酸堿程度,實(shí)質(zhì)為氫離子濃度的負(fù)十進(jìn)制對(duì)數(shù),它對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育有著重要的影響。PH值的大小主要依靠PH所指示的顏色來(lái)識(shí)別。下面就來(lái)談?wù)?strong>實(shí)驗(yàn)室試劑中PH值對(duì)細(xì)胞的影響。
一、PH值在細(xì)胞中的作用
每個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)都需要一個(gè)適宜的 pH 值,在該 pH 值下它發(fā)揮較佳作用。 細(xì)胞內(nèi)外的PH值不同,而細(xì)胞內(nèi)部的PH值對(duì)細(xì)胞代謝、生長(zhǎng)和分裂等過(guò)程有著至關(guān)重要的作用。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)部的PH值偏離正常范圍時(shí),它會(huì)導(dǎo)致構(gòu)象酶發(fā)生變化,從而會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)部的酶活性,嚴(yán)重影響細(xì)胞的代謝和生長(zhǎng)發(fā)育。甚至于導(dǎo)致與極端溫度變化引起的影響一樣嚴(yán)重。如果該過(guò)程與理想的 pH 值偏離過(guò)大,有可能會(huì)導(dǎo)致 DNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)、α-螺旋和 β-折疊片受損,導(dǎo)致不可逆的變性。
因此,為了使細(xì)胞生長(zhǎng)良好,培養(yǎng)基具有穩(wěn)定的 pH 值至關(guān)重要。大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞在 pH 值為 7.4 時(shí)感覺(jué)很舒服。轉(zhuǎn)化細(xì)胞系偏好 7.0 至 7.4 的略低 pH 值,而正常成纖維細(xì)胞系偏好 7.4 至 7.7 之間的弱堿性 pH 值。
所以,許多培養(yǎng)基都添加了酚紅 pH 指示劑。如果pH值為7.4,則培養(yǎng)基呈紅色。在 DMEM 中加入 40 μM 酚紅后,培養(yǎng)基會(huì)在 pH 值升高時(shí)改變顏色,在 pH 值為 7.6 時(shí)變?yōu)榉奂t色,在 pH 值為 7.8 時(shí)變?yōu)樽仙?。?dāng)培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化時(shí)也就意味著培養(yǎng)基可能被酵母或真菌污染。
二、培養(yǎng)基中的PH值如何調(diào)整?
調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH值的方法有很多種,常用的方法包括:
- 添加緩沖液:緩沖液可以穩(wěn)定PH值,常用的緩沖液有HEPES、Tris等。
- 改變二氧化碳濃度:二氧化碳可以與水反應(yīng)生成碳酸,從而降低PH值。因此,通過(guò)調(diào)節(jié)二氧化碳濃度可以調(diào)節(jié)PH值。比如在三氣培養(yǎng)箱或二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)主要是通過(guò)調(diào)控 CO2 濃度來(lái)調(diào)整細(xì)胞培養(yǎng)物的PH值。
- 添加酸堿調(diào)節(jié)劑:如鹽酸、氫氧化鈉等,也可以直接改變培養(yǎng)基的PH值。
三、PH值的測(cè)量
在調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH值之前,需要先測(cè)量實(shí)驗(yàn)室試劑培養(yǎng)基的PH值。常用的PH值測(cè)量方法有:
- PH試紙法:將PH試紙浸泡在培養(yǎng)基中,根據(jù)試紙顏色的變化來(lái)判斷PH值。
- PH計(jì)法:使用PH計(jì)測(cè)量培養(yǎng)基的PH值,精度更高。
在生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)也可以通過(guò)PH傳感器讀數(shù)來(lái)判斷培養(yǎng)基的PH值,同時(shí)使用EKF葡萄糖乳酸分析儀來(lái)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物的乳酸含量,從而確定合適的補(bǔ)料的調(diào)整方案。
在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí),需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的調(diào)節(jié)PH值的方法和測(cè)量PH值的方法,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
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