本操作標準說明書旨在提供詳細指導,使用天根基因組提取試劑盒從血液樣本中提取血液基因組DNA 的詳細步驟。
一、實驗試劑及實驗耗材的準備:
- 天根基因組提取試劑盒
- 血液樣本
- 離心管
- 移液管和吸頭
- 微離心機
- 振蕩器
- 乙醇
- RNase A
- 蒸餾水
二、實驗步驟
1.樣本準備
- 使用EDTA管收集血液樣本并標記。
- 輕輕顛倒管子數(shù)次,確保充分混合。
2.溶解紅細胞
- 向2ml離心管中加入200μl血液裂解緩沖液。
- 將20μl血液樣本轉移到離心管中。
- 加入20μl蛋白酶K,輕輕顛倒均勻。
- 在56°C孵育混合物10分鐘,使紅細胞溶解。
3.DNA結合
- 向混合物中加入200μl結合緩沖液并充分混合。
- 以12,000 rpm離心管,離心1分鐘。不打擾沉淀物的同時廢棄上清液。
4.DNA洗滌
- 向離心管中加入500μl洗滌緩沖液I,使用高速離心機以12,000 rpm離心1分鐘,廢棄上清液。
- 重復使用洗滌緩沖液II進行洗滌步驟,使用高速離心機以12,000 rpm離心2分鐘,廢棄上清液。
- 再次用使用離心機以12,000 rpm離心3分鐘以去除剩余的乙醇。
5.DNA洗脫
- 向沉淀物中加入50-100μl洗脫緩沖液。
- 在室溫下孵育離心管5分鐘以洗脫DNA。
- 以12,000 rpm離心2分鐘,收集洗脫的DNA溶液。
6.定量和儲存
- 使用分光光度計或適當?shù)?/span>DNA定量方法測量DNA的濃度和純度。
- 將提取的DNA儲存于-20°C低溫冰箱中,供以后使用。
三.天根基因組提取試劑盒 使用注意事項
- 在整個操作過程中,佩戴適當?shù)膫€人防護設備,如手套和實驗服。
- 遵循良好的實驗室實踐,保持清潔的工作環(huán)境。
- 按照天根基因組提取試劑盒的使用說明書進行操作。
四、故障排除
- 如有任何困難或意外結果,請參考天根基因組提取試劑盒手冊的故障排除部分或咨詢技術支持。
提示:本操作標準說明書為使用天根基因組提取試劑盒從血液中提取基因組DNA提供了一般指南。用戶應遵循試劑盒手冊的說明,并根據(jù)具體需求和樣本類型的變化自定義協(xié)議。
本操作標準旨在確保使用天根基因組提取試劑盒進行高質量的DNA提取,并標準化過程以獲得一致可靠的結果。
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