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細胞凍存液-細胞凍存的注意事項有哪些
作者: 快速細胞凍存液 編輯: 蘇州阿爾法生物 來源: 細胞凍存的注意事項有哪些 發(fā)布日期: 2024.03.18
信息摘要:
HyCyte 快速 細胞凍存液,不僅能降低凍存過程對細胞膜的損傷,維持高的細胞復蘇率;同時所有成分純度高化學特性穩(wěn)定,適用于各種動物細胞株(…

在細胞學研究中,為了方便長期保存和傳播細胞用于實驗和臨床應(yīng)用,常常需要采用冷凍存儲的方法。冷凍存儲是一種使細胞在極低溫度下安全保存的方法,一般使用液氮作為冷凍介質(zhì)。本文將介紹冷凍存儲的一般原則、技術(shù)要點以及注意事項。

QuickFreezing-M 細胞凍存液

一、冷凍存儲的原則與技術(shù)要點
1. 采用慢凍存融的方法:為了保持細胞的最大存活率,通常采用慢凍存融的方法。這意味著在冷凍和解凍過程中要逐漸降低或提高溫度,以避免快速的溫度變化對細胞產(chǎn)生不利影響。
2. 控制冷凍速度:冷凍物距離液氮面越近溫度越低,采用標準的低凍速度約為-1℃~12℃/分鐘。當溫度下降至-25℃時,下降速度可增至-5℃~-10℃/分鐘;到達-100℃時,則可迅速凍結(jié)在液氮中。冷凍物下降速度過快會影響細胞內(nèi)水分透出,過慢則可能促進冰晶的形成。因此,在冷凍物下降入液氮中時,要適當掌握凍存物下降的速度。
3. 監(jiān)測冷凍速度:對于初次凍存者,在下降凍存時,宜先用細木棒或其他工具伸入罐中,探測液面位置。同時,使用溫度計與凍存物并行,以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離以及溫度之間的關(guān)系。當熟練掌握這些參數(shù)和凍存技術(shù)后,可以僅依據(jù)下降時間和下降距離來獲得理想的凍存效果。
4. 不同細胞對冷凍速度的要求不同:不同類型的細胞對冷凍速度的要求也不一樣。一般而言,上皮細胞和成纖維細胞的耐受性較大,適宜的下降速度為-2℃~-3℃/分鐘;而胚胎細胞的耐受性較小,不宜太快。初次冷凍時,下降速度不應(yīng)超過-10℃/分鐘。

5. 選擇合適的防護劑:合適的防護劑和使用的量應(yīng)根據(jù)細胞的需求而定。對于初代培養(yǎng)細胞,使用二甲基亞砜(DMSO)較為常見;而一般細胞可使用甘油。防護劑的使用量應(yīng)盡量較小。有研究指出,人皮膚上皮細胞在20%-30%甘油中保存效果較好。


“QuickFreezing-I 昆蟲細胞凍存液

二、冷凍存儲的注意事項
1. 定期復蘇培養(yǎng):原則上,細胞在液氮中可以保存多年。然而,為了確保細胞的存活和質(zhì)量,建議在冷凍存儲一年后,再進行一次復蘇培養(yǎng)。這樣可以檢驗細胞的活性,并提高后續(xù)凍存的成功率。

2. 安全防護:在將凍存管放入或取出液氮容器時,要注意自身的安全,避免凍傷。同時,對于來自人源性或病毒感染的細胞株,應(yīng)特別小心。操作過程中,應(yīng)避免產(chǎn)生氣溶膠,小心使用有毒性試劑如DMSO,并避免尖銳物品傷人等。


一步細胞凍存液


舉一個實驗案例,幫助我們更好地理解冷凍存儲的過程和相關(guān)原理。
小明是一名生物學研究生,他在實驗室中進行一項關(guān)于白血病治療的研究。為了長期保存重要的白血病細胞株,小明需要利用冷凍存儲的技術(shù)。
開始小明按照實驗室的冷凍存儲規(guī)范,準備好冷凍介質(zhì)和凍存管。他選擇了DMSO,根據(jù)細胞類型和需求添加適量的甘油。然后,小明將白血病細胞株分散均勻,并加入冷凍介質(zhì)中。(其實直接使用細胞凍存液就可以)
接下來,小明使用細木棒探測液面位置,并使用溫度計監(jiān)測冷凍速度。在逐漸降溫的過程中,小明注意觀察細胞與液氮液面距離和溫度的變化。通過掌握這些參數(shù),小明熟練地完成了細胞的冷凍存儲。
為了確保細胞的長期保存和質(zhì)量,小明在冷凍存儲一年后,決定進行一次復蘇培養(yǎng)。他從液氮容器中取出凍存管,小心地防止凍傷。經(jīng)過合適的復蘇培養(yǎng)條件,白血病細胞株成功復蘇,并保持了原有的活性和特性。

通過冷凍存儲的技術(shù),小明成功地保存了重要的白血病細胞株,為未來的實驗和研究提供了可靠的資源。

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由此可見,冷凍存儲是一項重要的細胞保存技術(shù),需要根據(jù)不同細胞類型和要求掌握相應(yīng)的冷凍速度和防護劑使用。另外,定期復蘇培養(yǎng)可以保證細胞的存活和質(zhì)量。在操作過程中,要注意安全防護,避免引起凍傷和其他意外事故。冷凍存儲技術(shù)的應(yīng)用將為生物學研究和臨床治療提供便利和可靠的細胞資源。

HyCyte  快速  細胞凍存液    一步凍存液特點:

  1. 無需程序降溫,-80°C一步凍存

  2. 無血清、無任何蛋白

  3. 高復蘇率>90%

  4. 不影響干細胞的特性,細胞增殖不改變、細胞分化不改變

  5. 使用簡單、穩(wěn)定性高

  6. 可以直接使用,無需任何操作


HyCyte 快速 細胞凍存液,不僅能降低凍存過程對細胞膜的損傷,維持高的細胞復蘇率;同時所有成分純度高化學特性穩(wěn)定,適用于各種動物細胞株(腫瘤細胞和常規(guī)細胞)的長期凍存。 產(chǎn)品配方,無動物性蛋白,無血清,可避免動物蛋白的污染,細胞凍存10年以上的均能安全穩(wěn)定復蘇。產(chǎn)品省去繁瑣費時的程序降溫過程,直接重懸細胞后置于-80°C冰箱即可完成凍存。該凍存液含有飽和脂肪酸和多糖、抗氧化等各種特殊成分,能夠提高長期凍存細胞的存活率和復蘇活力,適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞株庫存。

| 質(zhì)量保證

經(jīng)過嚴格的無菌檢測、滲透壓、pH 檢驗和內(nèi)毒素,確保產(chǎn)品不含細菌、真菌、支原體及病毒等。

常規(guī)細胞凍存,細胞存活率高于90%。

| 運輸保存 

常溫運輸,2~8℃長期保存,有效期12個月。 




蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司成立于2008年,位于蘇州園區(qū)生物納米園(Biobay)A5幢301室。公司管理團隊專注于科學儀器行業(yè)十四年,擁有專業(yè)的技術(shù)團隊與完善的售后服務(wù)體系,目前已為300余家實驗室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù),涵蓋各大高校、檢測中心、科研機構(gòu)、制藥企業(yè)等13個群體。提供的實驗室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱,恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀,瑞寧移液器,生物反應(yīng)器,發(fā)酵罐,超低溫冰箱,液氮罐,高壓滅菌器,超純水機,天平,離心機,離心濃縮儀、研磨機、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱,梅特勒,樂楓,搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個余廠家。

四張拼圖

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