關(guān)鍵詞:抗體  科普  pcr 熒光定量 pcr 免疫PCR  酶聯(lián)免疫 ELISA

   多年來，研究人員一直依賴免疫檢測(cè)技術(shù)，如蛋白質(zhì)印跡、流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA) ，但 免疫 PCR 是一種相對(duì)較新的方法。通過將 酶聯(lián)免疫 ELISA 與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 相結(jié)合，免疫 PCR 提供了 較高 水平的檢測(cè)靈敏度。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

ELISA 是一種將分子吸附到固體表面（通常是微孔板孔）上的測(cè)定。從廣義上講，存在三種不同類型的 ELISA?？乖陆?ELISA 是一種抗原與微孔板結(jié)合的方法。相比之下， ELISA 依賴于將適當(dāng)?shù)牟东@抗體吸附到微孔板孔中，然后在用另一種抗體檢測(cè)之前從樣品中吸附抗原。第三種形式，競(jìng)爭(zhēng) ELISA，當(dāng)分析物很小且不能同時(shí)與兩種不同的抗體結(jié)合時(shí)較 有用。它通常使用抗原向下設(shè)置。ELISA 操作簡(jiǎn)單，運(yùn)行相對(duì) 簡(jiǎn)單 ，并且很容易適應(yīng)高通量篩選。

聚合酶鏈反應(yīng)

PCR 是一種用于擴(kuò)增特定 DNA 片段的技術(shù)，只需少量的起始材料即可進(jìn)行。它采用三步循環(huán)過程：1) dsDNA 的熱誘導(dǎo)變性以分離兩條互補(bǔ)鏈，2) 降低溫度以允許 PCR 引物結(jié)合，3) 使用 DNA 聚合酶產(chǎn)生目標(biāo) DNA 的互補(bǔ)拷貝順序。在傳統(tǒng) PCR 過程中，擴(kuò)增的 DNA 在凝膠上運(yùn)行并用溴化乙錠染色。實(shí)時(shí) PCR (rtPCR) ，也稱為定量 PCR (qPCR) ，而是將 PCR 產(chǎn)物的產(chǎn)生與熒光強(qiáng)度相關(guān)聯(lián)，在檢測(cè)發(fā)生時(shí)生成數(shù)據(jù)。 rtPCR 靈敏度 較 高，動(dòng)態(tài)范圍大。

免疫 PCR ：兩全其美

只要有合適的抗體試劑可用，ELISA 就可以檢測(cè)任何蛋白質(zhì)，但是它可能不夠靈敏，無法識(shí)別低豐度的蛋白質(zhì)。雖然 rtPCR 提供指數(shù)信號(hào)放大，但它不能直接用于抗原檢測(cè)，因?yàn)樗皇褂每贵w。免疫 PCR 通過抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物結(jié)合了這兩種檢測(cè)形式。您可以將任何類型的 ELISA 轉(zhuǎn)化為免疫 PCR 檢測(cè)，只需將檢測(cè)抗體替換為抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物即可。

    例如，典型的ELISA 要求對(duì)目標(biāo)分析物具有特異性的抗體固定在微量滴定板的表面上。通過洗滌去除未結(jié)合的抗體，并在封閉步驟之后添加樣品。孵育后，洗去 表面 未結(jié)合的樣品，然后添加第二種分析物特異性抗體。如果使用直接檢測(cè)方法，該抗體將與檢測(cè)部分結(jié)合，例如酶或熒光染料。相反，間接檢測(cè)涉及另一輪洗滌步驟，然后添加綴合的抗物種二抗。

要將具有直接檢測(cè)的 ELISA 轉(zhuǎn)換為免疫 PCR 測(cè)定，只需將第二種抗原特異性抗體替換為抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物。在洗滌步驟之后，可以通過 rtPCR 擴(kuò)增和檢測(cè) DNA。

將 ELISA 轉(zhuǎn)化為免疫 PCR 檢測(cè)

在開發(fā)免疫 PCR 檢測(cè)時(shí)，調(diào)整現(xiàn)有的 ELISA 是有效的方法 。應(yīng)優(yōu)化測(cè)定的每個(gè)步驟 max 值 以特定讀數(shù)，同時(shí) min 背景信號(hào)。對(duì)于等效 ELISA，可能已經(jīng)知道諸如板包被方法、洗滌緩沖液和封閉溶液的類型、樣品孵育步驟的長(zhǎng)度和抗體的選擇等因素。

任何免疫測(cè)定的成功都取決于抗體試劑的質(zhì)量，但如果配置 正確，免疫 PCR 與其他測(cè)定形式相比具有許多優(yōu)勢(shì)：

• 高度靈敏—— 可以檢測(cè)皮克-飛克量的分析物
• 只需要少量樣品
• 與血清或尿液等復(fù)雜樣品兼容
• 可重現(xiàn)
• 提供多路復(fù)用選項(xiàng)
• 抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物的產(chǎn)生

  抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物的生產(chǎn)成本可能 較 高，因?yàn)閭鹘y(tǒng)的偶聯(lián)方法需要大量的抗體，并且在純化步驟中會(huì)產(chǎn)生重大損失。然而，免疫 PCR 正變得越來越容易獲得，因?yàn)?/span> 目前可以使用市場(chǎng)上的 的抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)試劑盒、酶聯(lián)免疫ELSIA 試劑盒等。

為什么切換到免疫 PCR ？

與其他免疫檢測(cè)方法相比，免疫 PCR 提供了 較 高的靈敏度。這使其成為檢測(cè)復(fù)雜樣品中低豐度分析物的 有效工具 ，因?yàn)闃悠凡牧峡梢?/span> 大幅度 稀釋，從而降低背景影響并提高分析性能。該技術(shù)還 能 提供一致且可重復(fù)的數(shù)據(jù)。

蘇州阿爾法生物提供的免疫PCR 試劑包括： ELSIA試劑盒、酶聯(lián)免疫ELSIA試劑盒、抗體、一抗、二抗、蛋白檢測(cè)試劑盒、PCR引物、PCR、QPCR相關(guān)生物試劑。0512-62956104或18934597460

蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司成立于2008年，位于蘇州園區(qū)生物納米園（Biobay）A5幢301室。公司管理團(tuán)隊(duì)專注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年，擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)與完善的售后服務(wù)體系，目前已為300余家實(shí)驗(yàn)室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)，涵蓋各大高校、檢測(cè)中心、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)等13個(gè)群體。提供的實(shí)驗(yàn)室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀，瑞寧移液器，生物反應(yīng)器，發(fā)酵罐，超低溫冰箱，液氮罐，高壓滅菌器，超純水機(jī)，天平，離心機(jī)，離心濃縮儀、研磨機(jī)、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱，梅特勒，樂楓，搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個(gè)余廠家。