NK-92細(xì)胞-人惡性非霍奇金淋巴瘤的自然殺傷細(xì)胞

 貨號(hào)：TCH-C292 

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞名稱：人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

細(xì)胞別稱：NK92; Natural Killer-92; NK-92.05; Neukoplast; aNK

細(xì)胞簡(jiǎn)稱：NK-92

產(chǎn)品貨號(hào)：TCH-C292

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：淋巴

疾病特征：惡性非霍奇金淋巴瘤

細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系：α－MEM+12.5% FBS+12.5%HS+0.2mM肌醇+0.1mM 2-巰基乙醇+0.02mM葉酸+200U/mLIL-2+1%P/S

配套培養(yǎng)基貨號(hào)：TCH-G292

 NK-92細(xì)胞是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來(lái)的一株IL-2依賴型NK細(xì)胞株。NK-92細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562細(xì)胞和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞(經(jīng)過(guò)照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。NK-92細(xì)胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標(biāo)記陽(yáng)性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

NK-92細(xì)胞-人惡性非霍奇金淋巴瘤的自然殺傷細(xì)胞  培養(yǎng)要點(diǎn)

 1. NK92細(xì)胞為懸浮生長(zhǎng)，大部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，少數(shù)細(xì)胞分散，并且細(xì) 胞間隙會(huì)有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片；

 2. NK92細(xì)胞對(duì)IL-2敏感。培養(yǎng)基中IL-2降解，將導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。IL-2 在-20℃解凍后置于4℃冰箱保存，4℃保存不應(yīng)超過(guò)一周。配制好的新鮮培養(yǎng)基 要盡快用完，建議每次使用前拿出來(lái)預(yù)熱，使用完畢后放回4℃冰箱保存；

 3. NK92細(xì)胞對(duì)離心敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，換液周期為2~3天，建議交替使用 半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離 心次數(shù)，細(xì)胞狀態(tài)不佳或細(xì)胞量少的時(shí)候，一般不建議離心； 

4. NK92細(xì)胞對(duì)機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量避免吹打力道過(guò)大。 暴力吹打會(huì)使死細(xì)胞和細(xì)胞碎片增加。 

5. 正常培養(yǎng)時(shí)，NK 92細(xì)胞團(tuán)的間隙有部分死細(xì)胞和細(xì)胞碎片是正常的， 如細(xì)胞碎片過(guò)多，可通過(guò)低速離心去除部分細(xì)胞碎片（800rpm,5min）。

 6. 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。 

7. 細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，聚集的細(xì)胞團(tuán)會(huì)逐漸增大，正常的細(xì)胞團(tuán)在顯微鏡下呈現(xiàn) 白色透亮狀。若細(xì)胞聚集太多，出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)中部發(fā)暗時(shí)，可傳代； 8. 細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)要求很高，在正常培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)避免細(xì)胞團(tuán)塊太大， 這會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)不足；細(xì)胞團(tuán)塊過(guò)大時(shí)，需要稍微吹散，注意控制吹打次數(shù)，不需 刻意吹散成單個(gè)細(xì)胞。

 9. NK92的傳代方法：將細(xì)胞團(tuán)用移液器輕輕吹散，均分到兩個(gè)瓶子里， 每瓶再補(bǔ)充等量培養(yǎng)基。 

10. NK92的凍存方法：細(xì)胞凍存的時(shí)候，細(xì)胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。