免疫測定 (IA) 是極其重要的生物分析方法，免疫測定的原理及免疫測定方法用于量化溶液中從小分子到大分子的分析物（血清、毒素、激素等），使用抗體或抗原作為生物識別劑。通常應(yīng)用于廣泛的科學(xué)學(xué)科，包括生物制藥分析、臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測和食品檢測。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

1917 年，奧地利生物學(xué)家卡爾·蘭德施泰納 (Karl Landsteiner) 開發(fā)了分析具有抗原特性的小分子的方法。他的方法成為發(fā)展免疫分析的框架。從 1995 年到 2017 年，科學(xué)家們開發(fā)了廣泛的免疫測定法，可以對生物樣品進(jìn)行定性和定量檢測。

IA在臨床決策中起著至關(guān)重要的作用，因此對于醫(yī)療保健環(huán)境來說是必不可少的。大多數(shù)免疫測定方法基于放射免疫測定（RIA）和酶免疫測定（EIA）。一種常見的 EIA 類型是酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA)，它有許多應(yīng)用。ELISA 和 RIA 試劑盒均可在市場上買到，用于檢測各種分析物。這些測定法具有極高的特異性和敏感性，因此可作為大量分析物（抗原）的金標(biāo)準(zhǔn)。免疫測定的主要優(yōu)點(diǎn)包括價(jià)格低廉、檢測低水平分子的能力、準(zhǔn)確性和廣泛的適用性。  

免疫測定原理

為應(yīng)對細(xì)菌和病毒等外來物質(zhì)或抗原，所有動(dòng)物和人類都會通過免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體?？贵w是 Y 形抗原特異性蛋白質(zhì)，可在特定位點(diǎn)與抗原結(jié)合。如上所述，免疫測定基于抗體-抗原結(jié)合關(guān)系來檢測溶液中的特定分子。       

科學(xué)研究中使用的不同類型的來進(jìn)行免疫測定。

當(dāng)前的免疫測定方法主要有以下幾種：

1.放射免疫分析 (RIA)

放射免疫測定法使用抗體來量化生物樣品中存在的抗原量。這種檢測非常靈敏和特異，因此它可以檢測到樣品中低至幾個(gè)象形圖的抗原。RIA 的基本原則是競爭性約束。在該方法中，目標(biāo)抗原使用放射性同位素標(biāo)記并與其特異性抗體結(jié)合。

放射性抗原與非放射性抗原（來自血清樣品）競爭固定數(shù)量的受體結(jié)合位點(diǎn)或抗體?？贵w的競爭導(dǎo)致一定數(shù)量的標(biāo)記抗原的釋放，因此它與標(biāo)記抗原與未標(biāo)記抗原的比例成正比。

在增加未標(biāo)記抗原的濃度時(shí)，它們?nèi)〈Y(jié)合的標(biāo)記抗原。隨后，將結(jié)合的抗原與未結(jié)合的抗原分離，并測量殘留在上清液中的游離抗原的放射性。RIA 方法的主要優(yōu)點(diǎn)是以極高的精度和靈敏度測量分析物。

2.酶免疫分析 (EIA)

盡管酶免疫分析 (EIA) 的主要原理與 RIA 相似，但它使用酶作為標(biāo)記，而不是放射性同位素。在該測定中，酶分子通過合適的反應(yīng)偶聯(lián)到免疫分析試劑中，隨后進(jìn)行正常的免疫測定程序。

結(jié)合和游離部分分離后，通過添加底物測定酶活性。由于酶促反應(yīng)，形成有色產(chǎn)物，使用分光光度計(jì)對其進(jìn)行測量。測量的信號或產(chǎn)品顏色的強(qiáng)度類似于分析物的濃度。

3.熒光免疫分析 (FIA)

熒光免疫分析也與RIA的工作原理類似，只是標(biāo)記的是熒光團(tuán)而不是放射性同位素。FIA 分為異質(zhì)和均質(zhì)測定，這取決于是否需要分離步驟。這些測定可以以競爭性或非競爭性形式進(jìn)行。

異構(gòu)競爭FIA方法用于測定生物樣品中的藥物，例如氨基糖苷類抗生素、尿液中的苯甲酰愛康寧、人血清中的甲狀腺素等。 

在抗體結(jié)合導(dǎo)致標(biāo)記分析物的熒光特性發(fā)生某些變化的情況下，使用均相競爭 FIA 方法。該方法還用于直接從反應(yīng)混合物中監(jiān)測分析物的濃度。

4.化學(xué)發(fā)光免疫分析 (CLIA)

化學(xué)發(fā)光免疫分析是以化學(xué)發(fā)光物質(zhì)作為標(biāo)記物。通常，發(fā)光是電子從激發(fā)態(tài)躍遷到基態(tài)時(shí)發(fā)出的可見光或近可見光輻射。該技術(shù)因其檢測限低、性能高和特異性好而越來越多地用于藥物分析。

5.脂質(zhì)體免疫分析 (LIA)

該免疫測定使用脂質(zhì)體封裝標(biāo)記物。脂質(zhì)體用于 LIA，與分析物或抗體偶聯(lián)，然后進(jìn)行正常的免疫測定過程。LIA 的檢測取決于釋放封裝標(biāo)記物的脂質(zhì)體的裂解。這些測量的標(biāo)記與分析物的濃度相關(guān)。 

6.毛細(xì)管電泳免疫分析 (CEIA)

毛細(xì)管電泳免疫分析是一種相對較新的技術(shù)，用于靈敏檢測分析物。該技術(shù)基于毛細(xì)管電泳分離和異質(zhì)免疫分析原理的結(jié)合。

CEIA 涉及抗體與作為固相免疫反應(yīng)器的微毛細(xì)管的修飾內(nèi)表面的共價(jià)結(jié)合。分析物的檢測基于免疫測定。這種方法非常靈敏，能夠檢測皮摩爾水平的分析物。

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