欧美亚洲国产专区_国产欧美日韩一区二五月天_两个人在线观看免费视频_91久久资源国产_男人边吃奶边做免费视频_亚洲成人有码在线观看_日韩中文字幕一级无码_国产视频在线一区二区_不卡在线观看欧美无专区_国产对白刺激精品乱子伦视频

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司

16年專注生物實驗室儀器設(shè)備&耗材綜合供應(yīng)

0512-6295610418934597460

阿爾法構(gòu)建全服務(wù)鏈體系 尊享高于原廠服務(wù)的價值
使用熒光定量PCR儀進(jìn)行qPCR技術(shù)優(yōu)化操作與數(shù)據(jù)分析技巧
作者: 蘇州阿爾法生物實驗室儀器 編輯: 熒光定量PCR儀 來源: qPCR技術(shù) 發(fā)布日期: 2024.07.10
信息摘要:
實時熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)作為分子生物學(xué)領(lǐng)域中重要的實驗室儀器,已廣泛應(yīng)用于各類生物學(xué)研究。然而,由于操作不當(dāng),許多研究人員在實驗中…

實時熒光定量PCRqPCR)技術(shù)作為分子生物學(xué)領(lǐng)域中重要的實驗室儀器,已廣泛應(yīng)用于各類生物學(xué)研究。然而,由于操作不當(dāng),許多研究人員在實驗中遇到了數(shù)據(jù)精度不高、重復(fù)性差、可信度差等問題。本文針對這些問題,從引物操作技巧、反應(yīng)體系配制技巧、陰性對照技巧以及結(jié)果分析技巧四個方面,詳細(xì)介紹了使用熒光定量PCR儀時如何優(yōu)化qPCR實驗操作和數(shù)據(jù)分析,以提高實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

PCR優(yōu)化

一、引物的操作技巧

使用熒光定量PCR儀在進(jìn)行qPCR實驗時,引物的設(shè)計至關(guān)重要。使用引物設(shè)計軟件進(jìn)行設(shè)計時,需在操作界面上設(shè)定相應(yīng)的參數(shù),擴(kuò)增子參數(shù)一般設(shè)定范圍為80200bp。擴(kuò)增子長度越短,擴(kuò)增效率越高,可選擇設(shè)定在110bp。引物一般由試劑公司合成,為干粉狀態(tài),在溶解前,最好用高速離心機(jī)低溫快速離心30s,使得引物干粉匯聚到管底,避免損失引物。收到引物后,需要先摸索引物的退火溫度和終濃度,以達(dá)到較理想的qPCR擴(kuò)增效果,其次測定引物的擴(kuò)增效率。

二、反應(yīng)體系配制技巧

正式實驗時,每個樣本至少3個重復(fù),為了消除各重復(fù)之間的系統(tǒng)誤差,將所需的所有試劑和模板加在同一個PCR管中,充分渦旋混勻后,再分裝到3個重復(fù)孔中,這樣可有效減小系統(tǒng)誤差。另外,建議使用20μL以上的反應(yīng)體積,以消除由于加樣不準(zhǔn)造成的系統(tǒng)誤差。

三、陰性對照的技巧

   陰性對照一般是指用水代替模板的反應(yīng)孔,體系中除了模板,包括了其他的反應(yīng)組分。由于qPCR的高靈敏性,陰性對照有出現(xiàn)擴(kuò)增信號的情況,那么在針對這類問題時,我們需要判斷其原因所在。使用染料法進(jìn)行qPCR實驗時,首先查看陰性對照的溶解曲線主峰是否跟陽性孔的主峰位置一致。如果不一致,則可能是引物性能不好,無模板或使用低濃度模板下會出現(xiàn)引物二聚體,這種情況則需要考慮更換引物,保證引物特異性以及擴(kuò)增效率。


Q2000A


四、結(jié)果分析的技巧

使用熒光定量PCR儀進(jìn)行相對定量分析時,常用到的是2-ΔΔCq法,但是這種方法比較粗放,因為它的前提是假定所有引物的擴(kuò)增效率都為100%。更為準(zhǔn)確的定量則需要考慮不同引物擴(kuò)增效率的差別??上扔锰荻认♂尩哪0鍦y試各引物的擴(kuò)增效率E,獲得實際擴(kuò)增效率之后,后續(xù)實驗只需要在軟件中直接輸入擴(kuò)增效率E值,即可計算更精準(zhǔn)的相對定量值。

通過對qPCR技術(shù)中引物操作技巧、反應(yīng)體系配制技巧、陰性對照技巧以及結(jié)果分析技巧的優(yōu)化,可以在很大程度上提高實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

朗基PCR儀

Q2000B熒光定量PCR儀采用目前進(jìn)口半導(dǎo)體技術(shù)以及 MARLOW 半導(dǎo)體芯片制造商生產(chǎn)的半導(dǎo)體材料做為核心部件,確保產(chǎn)品的擴(kuò)增速度、分析結(jié)果及系統(tǒng)可靠性,成為目前PCR行業(yè)的主流設(shè)備。具備多項先進(jìn)功能,其屏幕可90°調(diào)節(jié),適應(yīng)不同視角需求,確保了操作的便利性;同時,它通過同步熒光檢測減少了延時誤差,提高了數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。設(shè)備自帶10英寸全真彩觸控屏,允許用戶直接在屏幕上編輯、查看和運(yùn)行定量PCR及普通PCR程序,無需依賴電腦。采用新一代半導(dǎo)體升降溫技術(shù),擁有高達(dá)6°C/SEC的變溫速率和100萬次循環(huán)的使用壽命。頂部檢測技術(shù)有效屏蔽背景干擾,提高熒光信號靈敏度和信噪比,兼容白管和透明管,確保結(jié)果的準(zhǔn)確。此外,該還溫度梯度功能,便于優(yōu)化反應(yīng)條件,并支持遠(yuǎn)程操控,實時查看實驗數(shù)據(jù)及分析結(jié)果。另外,采用SSLPTM短光程靜態(tài)熒光CCD成像技術(shù),保證了熒光信號的穩(wěn)定性和靈敏度。0512-62956104或18934597460.



蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司成立于2008年,位于蘇州園區(qū)生物納米園(Biobay)A5幢301室。公司管理團(tuán)隊專注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年,擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊與完善的售后服務(wù)體系,目前已為300余家實驗室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù),涵蓋各大高校、檢測中心、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)等13個群體。提供的實驗室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱,恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀,瑞寧移液器,生物反應(yīng)器,發(fā)酵罐,超低溫冰箱,液氮罐,高壓滅菌器,超純水機(jī),天平,離心機(jī),離心濃縮儀、研磨機(jī)、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱,梅特勒,樂楓,搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個余廠家。

四張拼圖

阿爾法推薦資訊

蘇州阿爾法生物

抗體生產(chǎn)中常用的實驗室儀器實驗試劑實驗耗材一覽表

抗體研發(fā)生產(chǎn)是一個復(fù)雜的過程,涉及多種實驗室儀器、試劑和耗材。以下是抗體研發(fā)生產(chǎn)中常用的實驗室儀器、試劑和耗材的一覽表:實驗室儀器:1.電子天平-用于精確稱量試劑和樣品。2.磁力攪拌器-用于攪拌溶液,加速反應(yīng)。3.離心機(jī)-用于分離混合物中的不同成分。4.PCR儀-聚合酶鏈反應(yīng)儀器,用于擴(kuò)增DNA片段。5.凝膠成像......
2024-07-10
蘇州阿爾法

常用的實驗室儀器設(shè)備的英文名稱及縮寫

這里歸納一下常用的實驗室儀器設(shè)備的英文名稱及縮寫。
2024-07-10
單克隆細(xì)胞系構(gòu)建的利器-Cell Metric細(xì)胞成像儀

單克隆細(xì)胞系構(gòu)建的利器-Cell Metric細(xì)胞成像儀

在生物科學(xué)研究中,單克隆細(xì)胞系的構(gòu)建是一個重要且耗時的過程。為了獲得具有特定特性的細(xì)胞株,研究人員需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、篩選和鑒定等一系列復(fù)雜的步驟。CellMetric細(xì)胞成像儀應(yīng)運(yùn)而生,為降低構(gòu)建單克隆細(xì)胞系的時間提供了強(qiáng)大的工具。
2024-06-26

咨詢熱線

0512-62956104