細(xì)胞培養(yǎng)是指使真核或原核細(xì)胞在生理?xiàng)l件下生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)室方法。它的起源可以追溯到 20 世紀(jì)初，當(dāng)時(shí)它被引入研究組織生長(zhǎng)和成熟、病毒生物學(xué)和疫苗開(kāi)發(fā)、基因在疾病和健康中的作用，以及使用大規(guī)模雜交細(xì)胞系生產(chǎn)生物制藥。建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備的條件有哪些？

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室安全

   細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要管理與培養(yǎng)細(xì)胞攜帶的感染因子（例如 HBV 或 HIV）相關(guān)的潛在危害，還需要控制可能具有毒性、腐蝕性或致突變性的試劑。這些潛在危害進(jìn)入人體后（例如，通過(guò)皮膚和粘膜與固體、液體或氣溶膠接觸）會(huì)危及實(shí)驗(yàn)室工作人員的健康，并在處理不當(dāng)時(shí)威脅環(huán)境。

實(shí)驗(yàn)室安全

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室安全主要包括：

● 每個(gè)實(shí)驗(yàn)室工作人員都應(yīng)對(duì)自己的健康和安全以及可能受到細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室工作影響的其他人的健康和安全負(fù)責(zé)。

● 進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室時(shí)必須穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備，離開(kāi)或污染任何個(gè)人防護(hù)設(shè)備時(shí)必須脫掉。在處理危險(xiǎn)劑時(shí)，必須立即取下可能受污染的手套并將其丟棄在生物危害廢物中。洗手。

●不建議穿著露趾鞋、短褲和裙子暴露皮膚。

●細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不允許食用食物、飲料、儲(chǔ)存雜貨、吸煙、使用化妝品或處理隱形眼鏡。

●在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)不應(yīng)使用手機(jī)。

●開(kāi)始工作前應(yīng)脫掉寬松的衣服（例如圍巾、懸垂的項(xiàng)鏈），并將頭發(fā)系在腦后。

●細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必須保持整潔并定期用消毒劑清潔（例如培養(yǎng)箱、層流罩和工作臺(tái)面）。

●所有與潛在傳染性或危險(xiǎn)物質(zhì)接觸的實(shí)驗(yàn)室工具在使用前后都必須進(jìn)行凈化處理。具有潛在感染性和危險(xiǎn)性的材料必須通過(guò)他們推薦的路線進(jìn)行凈化和處置。

●尖銳物品（例如移液器吸頭）必須立即通過(guò)指定的尖銳物品箱進(jìn)行處理。

●離開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)洗手。

●在接觸或溢出傳染性或危險(xiǎn)物質(zhì)時(shí)，應(yīng)通知實(shí)驗(yàn)室的安全官員，以就適當(dāng)?shù)亩糁坪蛢艋呗蕴岢鼋ㄗh。

細(xì)胞系的安全處理

  危險(xiǎn)病原體咨詢委員會(huì) (ACDP) 是由健康與安全執(zhí)行官 (HSE) 管理的國(guó)家機(jī)構(gòu)。它就接觸病原體對(duì)工人和其他人造成的危害和風(fēng)險(xiǎn)提出建議，并發(fā)布了這些建議。由于某些細(xì)胞類型具有致病性或攜帶致病因子，因此確定細(xì)胞系的危險(xiǎn)系數(shù)并實(shí)施適當(dāng)?shù)陌踩胧┓浅Ｖ匾＜?xì)胞系的安全處理主要包括書面風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和實(shí)驗(yàn)室設(shè)施審查。

   分類為危險(xiǎn)組 1 的微生物（例如，大腸桿菌K-12）或 2（例如，金黃色葡萄球菌）代表對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員和社區(qū)的低度或中度健康風(fēng)險(xiǎn)，并且依賴于有效的預(yù)防或治療方案。使用危險(xiǎn)組 3 的生物制劑進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)（例如，嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥相關(guān)冠狀病毒（SARS-CoV））和 4（例如，埃博拉病毒）涉及具有高健康風(fēng)險(xiǎn)的生物制劑，并且在感染后可能缺乏治療選擇。

因此，實(shí)驗(yàn)室空間需要提供與培養(yǎng)細(xì)胞類型的危險(xiǎn)組相對(duì)應(yīng)的防護(hù)等級(jí)。 

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的安全要求

   為了確保使用細(xì)胞系和生物危害劑的安全工作環(huán)境，必須在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中佩戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備 (PPE)。實(shí)驗(yàn)室工作服、手套和護(hù)目鏡在實(shí)驗(yàn)室工作人員和潛在危險(xiǎn)源之間形成一道屏障。此外，生物安全柜依靠 HEPA 過(guò)濾空氣的穩(wěn)定、單向流動(dòng)，創(chuàng)造一個(gè)封閉、通風(fēng)的工作空間。這較大程度地減少了研究人員和環(huán)境對(duì)與培養(yǎng)細(xì)胞相關(guān)的有害物質(zhì)的暴露，同時(shí)保護(hù)細(xì)胞培養(yǎng)物免受污染。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室處理細(xì)胞培養(yǎng)基和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，還建議查看與實(shí)驗(yàn)室試劑相關(guān)的材料安全數(shù)據(jù)表 (MSDS)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法

盡管在不同的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中采用了各種技術(shù)和檢測(cè)方法，但細(xì)胞培養(yǎng)工作的共同主題是無(wú)菌——?jiǎng)?chuàng)造一個(gè)沒(méi)有不需要的病原微生物（包括細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲）的微環(huán)境。由于無(wú)菌是成功的細(xì)胞培養(yǎng)工作的重要組成部分，因此需要建立單獨(dú)的細(xì)胞房或指定區(qū)域，不得用于其他目的。

細(xì)胞房常用的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備如下：

生物安全柜：創(chuàng)造無(wú)菌工作臺(tái)面；II類和III類推薦

CO 2培養(yǎng)箱：為細(xì)胞生長(zhǎng)提供生理環(huán)境

倒置光學(xué)顯微鏡：評(píng)估細(xì)胞形態(tài)和計(jì)數(shù)細(xì)胞

冰箱、冰柜（-20°C、-80°C）：儲(chǔ)存細(xì)胞、細(xì)胞材料和培養(yǎng)成分

離心機(jī)：細(xì)胞分離、濃縮細(xì)胞

酸度計(jì)：確定培養(yǎng)基成分的正確 pH 值

移液器和移液吸頭：分裝不同體積的細(xì)胞，分裝試劑

細(xì)胞培養(yǎng)基和輔助成分：培養(yǎng)細(xì)胞（養(yǎng)分來(lái)源）

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，確定生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)并準(zhǔn)備合適的接種密度

高壓滅菌器：對(duì)與細(xì)胞接觸的移液器和其他設(shè)備進(jìn)行消毒

真空泵：吸出細(xì)胞培養(yǎng)基

水浴鍋（可調(diào)溫）：預(yù)熱細(xì)胞培養(yǎng)基，解凍細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)瓶：以不同形式培養(yǎng)細(xì)胞（例如，燒瓶、培養(yǎng)皿、96 孔板）

三角搖瓶、生物反應(yīng)器：適用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)

廢物容器（生物危害）：垃圾分類處理

其他設(shè)備：包括 流式細(xì)胞儀、細(xì)胞分選儀、活細(xì)胞成像分析儀等。#細(xì)胞培養(yǎng)瓶#

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