細(xì)胞轉(zhuǎn)染現(xiàn)在是分子生物學(xué)的核心技術(shù)，也是基因制藥的必要前提。免疫穿孔轉(zhuǎn)染法技術(shù)是用涂有抗體并與特定細(xì)胞表面跨膜蛋白結(jié)合的珠子如何在移除珠子時在細(xì)胞中產(chǎn)生孔，從而允許用 DNA 或其他大分子轉(zhuǎn)染細(xì)胞。這種通過免疫穿孔對細(xì)胞進(jìn)行的獨(dú)特靶向轉(zhuǎn)染非常有效，并且減少細(xì)胞凋亡。

免疫穿孔轉(zhuǎn)染法的原理

  轉(zhuǎn)染細(xì)胞有多種方法，比如電穿孔 、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染 、磷酸鈣共沉淀 和 DEAE葡聚糖等方法 . 在這些方法中，只有電穿孔提供了將 DNA 和其他分子（如蛋白質(zhì)）引入活細(xì)胞的可能性。目前的方法都不能針對特定類型的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在這種新的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法中，抗體包被的珠子與特定的表面抗原結(jié)合，然后通過混合將珠子從細(xì)胞中剪下：這會在細(xì)胞膜上形成瞬時孔，大分子可以通過這些孔進(jìn)入。粒細(xì)胞、分化的人淋巴母細(xì)胞 HL-60 細(xì)胞通常在其表面表達(dá) CD71。當(dāng)在二甲基亞砜 (DMSO) 存在下誘導(dǎo)分化時，細(xì)胞停止表達(dá) CD71，而是表達(dá) CD11b。

免疫穿孔細(xì)胞轉(zhuǎn)染法的基本過程

將涂有抗 CD11b 抗體 (DYNAFECT-CD11b) 或抗 CD71 抗體 (DYNAFECT-CD71) 的 DYNAFECT 珠子在旋轉(zhuǎn)的上下混合器上以 33 rpm 在 22 °C 下混合 6 小時，與未誘導(dǎo)的 HL- 60 個細(xì)胞或用 DMSO 誘導(dǎo) 3 天的細(xì)胞。為了在 2-ml 微量離心管中混合，可將 10 7 個磁珠和 5×10 5 個細(xì)胞懸浮在含有 0.2 μg 編碼綠色熒光蛋白的質(zhì)粒 DNA 載體 pEGFP-C1（4.7 kb）的 0.5 ml 轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基（Dynal AS）中。轉(zhuǎn)染后，使用磁力分離器去除磁珠，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移回組織培養(yǎng)基中并在分析前再培養(yǎng) 48 小時。

   通過流式細(xì)胞技術(shù)來確定細(xì)胞轉(zhuǎn)染的程度。 DYNAFECT-CD71 微珠促進(jìn) DNA 轉(zhuǎn)染到正常的 HL-60 細(xì)胞中，但當(dāng)細(xì)胞分化且不再表達(dá) CD71 時，這些微珠不再發(fā)生轉(zhuǎn)染。相反，將未分化的 HL-60 細(xì)胞與 DYNAFECT-CD11b 珠子混合不會導(dǎo)致細(xì)胞被 DNA 轉(zhuǎn)染，但當(dāng)細(xì)胞分化并開始表達(dá) CD11b 時，這些磁珠確實會被轉(zhuǎn)染。

    因此，免疫穿孔有可能靶向混合群體中特定類型的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，這取決于它們的免疫特性，并允許靶向細(xì)胞吸收各種不同的分子。這也發(fā)生在幾種哺乳動物細(xì)胞系中，這些細(xì)胞系具有一系列針對選定細(xì)胞表面抗原的不同抗體。正常情況下，細(xì)胞轉(zhuǎn)染水平為 40-80%，具體取決于混合條件，而無活力細(xì)胞的數(shù)量通常會少于20%。

  關(guān)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染 的其它相關(guān)問題，可以進(jìn)入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司官網(wǎng) 或0512-62956104進(jìn)行咨詢。

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司成立于2008年，位于蘇州園區(qū)生物納米園（Biobay）A5幢301室。公司管理團(tuán)隊專注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年，擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊與完善的售后服務(wù)體系，目前已為300余家實驗室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)，涵蓋各大高校、檢測中心、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)等13個群體。提供的實驗室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀，瑞寧移液器，生物反應(yīng)器，發(fā)酵罐，超低溫冰箱，液氮罐，高壓滅菌器，超純水機(jī)，天平，離心機(jī)，離心濃縮儀、研磨機(jī)、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱，梅特勒，樂楓，搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個余廠家。