Cas9基因敲除細(xì)胞系服務(wù)

Cas9-Cell Line Gene Knock-Out service（CGKO）基因敲除細(xì)胞系服務(wù)是針對(duì)各種常用的細(xì)胞系，進(jìn)行基因片段敲除的技術(shù)服務(wù)。

主要提供：Cas9介導(dǎo)的大片段基因敲除（非移碼）的方式導(dǎo)致細(xì)胞基因功能缺失，基因敲除可以將基因功能完全消除，比RNA干擾獲得的數(shù)據(jù)更加確定，沒有RNA干擾殘留的基因功能背景的干擾，目前越來越成為主流的基因功能研究方式。使用Cas9X可以讓你輕松靶向更高分的文章！

   使用Cas9的進(jìn)行細(xì)胞系基因敲除的過程中發(fā)現(xiàn)：不同的位點(diǎn)不同的細(xì)胞系的效率差異很大，原因包括：不同的細(xì)胞株的基因拷貝數(shù)的差異很大（很多細(xì)胞系并非二倍體，而是混雜的多倍體），很多細(xì)胞的基因存在基因切割位點(diǎn)突變的問題（導(dǎo)致按照生物基因庫設(shè)計(jì)的gRNA無法發(fā)揮作用），還有細(xì)胞無法獲得單克隆，這些都是目前進(jìn)行基因敲除的困難所在。

|   Cas9X使用新的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯⒓?xì)胞系的敲除效率進(jìn)行大幅的提升

1. 使用Cas9蛋白和gRNA的復(fù)合物直接進(jìn)行電轉(zhuǎn)，提高效率的同時(shí)減少非特異的切割；（目前報(bào)道脫靶率最低的方法）
2. 使用高效的電轉(zhuǎn)設(shè)備，具備更高的電轉(zhuǎn)效率和細(xì)胞存活率；
3. 使用更先進(jìn)的單克隆稀釋設(shè)備和方法，大幅提高陽性率；（提高2倍）
4. 持續(xù)建庫：我們也將提供更多的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞株和基因編輯細(xì)胞株產(chǎn)品供科研工作者選擇。
5. 大片段敲除，可以通過PCR快速鑒定；
6. 非移碼方式敲除，可以保證細(xì)胞系做基因回補(bǔ)無需考慮突變修飾的問題。

  
通過優(yōu)化，Cas9X在細(xì)胞系基因敲除的效率是傳統(tǒng)質(zhì)粒法的數(shù)倍（3-5倍）結(jié)合 ClonePlus技術(shù)，可以將效率提升10-15倍，也可以針對(duì)很多之前難以實(shí)現(xiàn)敲除的細(xì)胞株進(jìn)行基因敲除操作，而且周期比病毒法更短?？梢?周內(nèi)拿到基因敲除的細(xì)胞！
|   Cas9基因敲除細(xì)胞系  技術(shù)原理圖 

|   細(xì)胞工作流程

我們還能為您提供：

• 基因敲除細(xì)胞系服務(wù)
• 基因點(diǎn)突變細(xì)胞系服務(wù)
• 基因定點(diǎn)敲入細(xì)胞系服務(wù)
• 微生物基因編輯服務(wù)
• 基因敲除Cell Pool服務(wù)

 項(xiàng)目名稱

構(gòu)建MARVELD1基因敲除的人鼻咽癌細(xì)胞C666-1 

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
種屬：Human；  基因名稱：MARVELD1
gRNA位點(diǎn)1：ATACGCTACCTAACATGGCTGGG
gRNA位點(diǎn)2：CCAGCATGCAAAATACAATGGGG

細(xì)胞信息
種屬：Human       
細(xì)胞名稱：人鼻咽癌細(xì)胞C666-1             
培養(yǎng)基：DMEM，10%FBS                                             

細(xì)胞檢測                                                           
無菌檢測：合格；  支原體檢測：合格      
細(xì)胞克隆形成率檢測：細(xì)胞增殖能力較好，但克隆團(tuán)較小。
細(xì)胞基因型檢測：針對(duì)gRNA打靶位置及其附近基因組序列進(jìn)行測序。測序結(jié)果與理論序列一致。                                          
                                               
細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)                                                           
電轉(zhuǎn)參數(shù)：1350V,20ms,1次；  電轉(zhuǎn)體系：10 uL          
 
PCR篩選                                                            
篩選克隆數(shù)量：170； 雜合子數(shù)量：13； 純合子數(shù)量：2 

電泳圖示例                                                      
WT：490 bp； 雜合子：490 bp； 純合子：0 bp