HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑

 產(chǎn)品名稱：HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑

 產(chǎn)品貨號：shRNAx2.0

HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑 介紹

 該產(chǎn)品屬于二代HyCyte?基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)是基于海星生物的位點特異性SSR 重組酶技術(shù)開發(fā)的基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒。

HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑特點：

 該轉(zhuǎn)染試劑盒利用SSR (Site-specific Recombinase)重組酶實現(xiàn)干擾序列載體高效穩(wěn)轉(zhuǎn)，大幅提升了干擾效率。試劑盒的轉(zhuǎn)染操作與siRNA轉(zhuǎn)染操作一樣，構(gòu)建與病毒一樣的基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，是新型的基因干擾技術(shù)產(chǎn)品。

  干擾試劑盒包括了人(Human)和小鼠(Mouse)基因組的所有基因，shRNAx2.0 試劑盒包含2個優(yōu)選的shRNA干擾序列載體、1個表達(dá) GFP/對照shRNA干擾序列載體和1管位點特異性SSR 重組酶，通過SSR重組酶高效催化shRNA載體整合到細(xì)胞的基因組中，實現(xiàn)shRNA 片段的細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)效果；同時由于SSR重組酶整合效率極高，shRNA片段在目的細(xì)胞基因組大約含有10~100 個拷貝，高拷貝數(shù)大幅提升了shRNA片段的表達(dá)效果，從而提升了基因的干擾效果。shRNAx2.0載體包含有puro 抗性基因和GFP熒光基因，可以輕松通過熒光判斷干擾載體的轉(zhuǎn)染效率和目的載體表達(dá)效率，并通過Puromycin藥物篩選，獲得高表達(dá)的細(xì)胞株，輕松建立基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。 

     shRNAx2.0干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒的操作與siRNA轉(zhuǎn)染過程一樣簡單，對各種細(xì)胞都有非常好的干擾效果，也適用于間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs ）等的基因功能研究。

HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 優(yōu)勢特點

• 比病毒法更簡單——對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞都有非常好的干擾效果
• 細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)效率高——僅需1~2周便可以拿到長期穩(wěn)定干擾的細(xì)胞株

HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 產(chǎn)品組成

| 產(chǎn)品原理

HyCyte?基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)的干擾效率與傳統(tǒng)病毒法干擾效率相當(dāng)。因其獨有SSR重組酶可以構(gòu)建高拷貝“穩(wěn)轉(zhuǎn)”細(xì)胞株，同時可以通過藥物篩選到高效、穩(wěn)定的干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。shRNAx2.0試劑盒是除了病毒法之外唯一可以輕松獲得穩(wěn)定干擾的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的實驗方案。

使用HyCyte?基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)構(gòu)建干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)株的周期僅1~2周，便可以拿到長期穩(wěn)定干擾的細(xì)胞株，是大幅提升實驗速度的方案。

| 應(yīng)用流程

HyCyte?基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)操作步驟 (脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法)：

本試劑盒可以采用的轉(zhuǎn)染試劑是Lipofectamine? 2000 Reagent (cat#11668-030)，具體參照轉(zhuǎn)染試劑每種細(xì)胞情況。不同類型的轉(zhuǎn)染試劑，請按照制造商的操作說明進行轉(zhuǎn)染。

注意：懸浮細(xì)胞不推薦使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。

HyCyte?基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)操作步驟(電轉(zhuǎn)化法)：

本試劑盒可以Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，具體參照設(shè)備對每種細(xì)胞參數(shù)。不同類型的電轉(zhuǎn)設(shè)備，請按照制造商的操作說明進行優(yōu)化。

注意：懸浮細(xì)胞推薦使用電轉(zhuǎn)化法。

HyCyte?基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)配有GFP對照shRNA載體，可以按照實際使用的方法和細(xì)胞情況，進行實驗摸索，建議48小時后的目的細(xì)胞的GFP的陽性率不低于50%， shRNAx2.0試劑盒才能獲得較佳效果。