HyCyte 人脂肪間充質(zhì)干細胞

細胞簡稱：H ADSC

產(chǎn)品貨號：ADHX-C106

種屬來源：人

組織來源：脂肪

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基貨號：ADHX-G102

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質(zhì)量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

毒素檢測：＜10 EU/mL

參考文獻：

Bianco P, Robey P G,Simmons P J. Mesenchymal stem cells: revisiting history , concepts, and assays[J]. Cell Stem Cell, 2008,2(4):313

Bassi G, Pacelli L, Carusone R, et ai. Adipose-derived stromal cells(ASCs)[J]. Transfus Apher Sci, 2012,47(2):193

DelaRosa O, Sanchez-Correa B, Morgado S, et al. Human adipose derived stem cells impair natural killer cell function and exhibitlow susceptibility to natural killer mediated lysis[J]. Stem Cells Dev,2012,21(8):1333

Estes B T，Diekman B O,Gimble J M, et al. Isolation of adipose derived stem cells and their induction to a chondrogenic phenotype[J]. Nat Protoc,2010,5(7):1294

Bassi G,Pacelli L, Carusone R, et al. Adipose derived stromal cells (ASCs)[J].Transfus Apher Sci,2012,47(2): 193

貨號：ADHX-C106 

規(guī)格：1×10^6 cells/Vial |

收貨后處理方法:

 收到細胞后請檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損，并核對管身標簽信息和數(shù)量， 確認是否與裝箱單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。 如不立即進行實驗，請將細胞放至-80℃或液氮中保存。 

 凍存代次： P2 培養(yǎng)體系： HyCyteTM成人脂肪間充質(zhì)干細胞專用培養(yǎng)基（Cat. ADHX-G101）

 換液時機： 發(fā)現(xiàn)有比較多的死細胞或培養(yǎng)基顏色較黃時，應(yīng)換液。一般為每 2-3 天換液 

傳代比例： 一般為 1:2 

傳代周期： 細胞匯合度達 80%~90%時，可進行傳代，一般為 48~72 h，不可讓間充質(zhì)干細 胞完全融合或過度融合，以免發(fā)生生長接觸抑制，影響細胞的生長狀態(tài)。 

培養(yǎng)條件： 氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃ 

凍存條件： 使用一步凍存液 HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）

 1) 實驗前開啟水浴鍋預(yù)熱完全培養(yǎng)基。

 2) 在工作臺中準備好 15 mL 離心管加入 5 mL 預(yù)熱后的完全培養(yǎng)基。 

3) 從-80°C 冰箱中取出凍存管，將凍存管置于 37℃水浴鍋內(nèi)，快速搖動解凍直到內(nèi)容物融 化，同時需注意避免水面沒過管口。 

NOTE：建議將液氮中的細胞提前取出置于-80°C 待 液氮揮發(fā)后復(fù)蘇。 

4) 對凍存管外壁進行常規(guī)消毒后，在工作臺內(nèi) 小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次， 轉(zhuǎn)移至 15 mL 離心管內(nèi)。使用 1 mL 培養(yǎng)基 清洗凍存管內(nèi)壁，一并收集至 15 mL 離心管 內(nèi)。 

5) 250 g 離心 5 min，收集細胞沉淀，棄掉上清 并加入 2 mL 完全培養(yǎng)基重懸（如有臺盼藍可 取少量進行染色計數(shù)）。 

6) 將重懸后的細胞接種至 T25 或同等底面積器 皿，“劃十字”搖晃細胞培養(yǎng)器皿，使細胞均勻 分布。把細胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 

7) 24h 后鏡下拍照觀察，換液后繼續(xù)培養(yǎng)。如有 異常情況，請及時與我們聯(lián)系。

| HyCyteTM H ADSCs 的傳代

 1) 預(yù)熱 1×PBS、胰酶和完全培養(yǎng)基。 

2) 吸去原培養(yǎng)基。用 1×PBS 洗滌細胞 2~3 次。 

3) 吸去 1×PBS。加入胰酶。輕輕旋轉(zhuǎn)，使胰酶 覆蓋細胞表面，消化，顯微鏡下觀察約 70%~80%左右的細胞變圓后，用手輕拍培養(yǎng) 器皿外壁使細胞脫壁。 

4) 當觀察到細胞明顯脫落，立即加入預(yù)熱的完 全培養(yǎng)基終止消化。用吸管吸取液體，反復(fù)輕 柔吹打培養(yǎng)器皿底壁，使細胞徹底脫離器皿 底壁。 NOTE：建議可添加 2 倍胰酶用量的完全培養(yǎng)基用于 終止消化。 

5) 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中。用 1xPBS 清洗 底壁，收集細胞懸液至離心管中。 

6) 250 g 離心 5 min。

 7) 小心棄去上清液，加入 1~2mL 完全培養(yǎng)基重 懸細胞。

 8) 選擇合適的培養(yǎng)器皿，加入適量完全培養(yǎng)基， 按照合適的傳代比例（一般為 1:2）接種細胞， “劃十字”搖晃細胞培養(yǎng)器皿，使細胞均勻分布。

 9) 把細胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)。

| HyCyte H ADSCs 的凍存 

1) 待細胞生長至可傳代的匯合度，即可消化準備 凍存。 

2) 消化細胞，取少量細胞懸液計數(shù)。細胞懸液經(jīng) 250 g離心5 min。 

3) 小心棄掉上清。用4°C預(yù)冷的凍存液重懸細胞， 一般凍存密度為1×10^6個/mL。 

4) 對凍存管進行標識后，把細胞分裝到凍存管中， 旋緊凍存管蓋。 

5) 如使用HyCyte使用一步凍存液，凍存管直接 豎直放入-80°C冰箱即可。 如使用程序凍存液，需將凍存管放入程序降溫 盒后方可放入-80°C冰箱。 

6) 24小時后可將細胞轉(zhuǎn)移到液氮進行長期保存。