J82細(xì)胞

細(xì)胞名稱：人膀胱移行細(xì)胞癌（STR鑒定正確）

細(xì)胞簡(jiǎn)稱：J82細(xì)胞

細(xì)胞別名： J-82; J 82; J82COT; J82 COT

貨號(hào)：TCH-C221

規(guī)格：1×10?cells/T25 培養(yǎng)瓶

參考目錄價(jià)格：15 00元 (干冰運(yùn)輸需另加200元干冰費(fèi))  

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：膀胱

特征：移行細(xì)胞癌

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系： MEM+10%FBS+1%P/S

J82細(xì)胞培養(yǎng)基貨號(hào)：TCH-G221

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

J82細(xì)胞源自一名58歲膀胱移行細(xì)胞癌的白人男性。胞內(nèi)無(wú)橋粒，有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及突出絨毛，表達(dá)ras基因。

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J82細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

使用配套培養(yǎng)基貨號(hào)：TCH-G221

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

J82細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞 10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時(shí)加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；

6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng) ：不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間

消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

J82細(xì)胞凍存操作步驟：

凍存液：可有使用海星生物的一步凍存液，使用一步凍存法進(jìn)行細(xì)胞凍存。（不需要程序降溫盒）

凍存規(guī)格 200-300萬(wàn)/ml，1ml每管

如果采用程序凍存法的可以參考以下步驟：

1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4 度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入 -80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

J82細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

1.凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

2.由于J82細(xì)胞貼壁較弱，消化時(shí)間偏短，注意控制消化時(shí)間；

3.注意控制細(xì)胞密度，過(guò)高或者過(guò)低都可能影響細(xì)胞狀態(tài)，不要長(zhǎng)時(shí)間高密度培養(yǎng)；

4.細(xì)胞生長(zhǎng)較快，注意及時(shí)換液及傳代；

參考文獻(xiàn)：

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The cells form poorly differentiated squamous cell carcinomas.