Jurkat-Cas9細胞

細胞名稱：Jurkat-Cas9細胞 人T淋巴細胞白血病細胞Cas9穩(wěn)定表達細胞系

細胞簡稱：Jurkat-Cas9細胞

產(chǎn)品貨號：TCH-C225-M01

修飾基因：Cas9

修飾類型：過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)

轉(zhuǎn)導方法：慢病毒轉(zhuǎn)染

抗性基因：Hygro

細胞鑒定：Q-PCR檢測合格

種屬來源：人

組織來源：外周血

疾病特征：急性T淋巴細胞白血病

細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣

生長特性：懸浮生長

培養(yǎng)體系：RPMI-1640+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：24-48 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質(zhì)量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

   Jurkat-Cas9細胞 是Jurkat-FHCRC細胞株(Jurkat細胞株的衍生)的一個克隆。Jurkat細胞株來源于一個14歲男孩的外周血；經(jīng)佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體中的一種誘導后可產(chǎn)生大量IL-2(IL-2的產(chǎn)生需兩種類型的誘導劑)；表達T細胞受體、CD3。

細胞接收后處理方法

1.運輸方式：凍存管（默認發(fā)送方式）

① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損等情況，并核對細胞管上的標簽信息，細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。

② 收到細胞后如不立即進行實驗，則請將細胞放至-80℃或液氮中保存。

③ 實驗前開啟水浴鍋并預熱培養(yǎng)基，并備好15mL離心管加入5mL預熱后的培養(yǎng)基。

④ 將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi)，快速搖動解凍直到內(nèi)容物融化，同時需注意避免水面沒過管口。

⑤ 將凍存管外壁進行常規(guī)消毒后，在超凈臺內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。使用1 mL培養(yǎng)基清洗凍存管內(nèi)壁，一并收集至15mL離心管內(nèi)。

⑥ 250g離心5min，收集細胞沉淀，棄掉上清并加入2mL完全培養(yǎng)基重懸。

⑦ 取20μL細胞懸液至EP管，臺盼藍染色并計數(shù)，記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系，如無臺盼藍，可略過該步驟。

⑧ 將重懸后的細胞接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。

⑨ 24h后鏡下拍照并反饋我們，換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

2.運輸方式：培養(yǎng)瓶（貼壁細胞）

① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，有無破損漏液的情況，并核對細胞瓶上的標簽信息，細胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶內(nèi)的培養(yǎng)基是否澄清，鏡下觀察細胞是否狀態(tài)良好，并將細胞容器外壁進行常規(guī)消毒后，置于培養(yǎng)箱內(nèi)放置2-3h，讓脫壁的細胞可以重新貼附。

③ 小心開蓋移去瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，更換為細胞專用的完全培養(yǎng)基，按照培養(yǎng)器皿決定用量。若細胞脫壁過多，可將原培養(yǎng)基離心獲得細胞沉淀，再接種回原瓶內(nèi)。

④ 鏡下拍照并反饋我們，如細胞匯合度較低，則放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。如細胞匯合度達到80%以上，則可按照常規(guī)方法進行消化傳代。

3.運輸方式：培養(yǎng)瓶（懸浮細胞）

① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，有無破損漏液的情況，并核對細胞瓶上的標簽信息，細胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶內(nèi)的培養(yǎng)基是否澄清，鏡下觀察細胞是否狀態(tài)良好，拍照并反饋我們。

③ 將細胞容器外壁進行常規(guī)消毒后，置于超凈工作臺內(nèi)小心開蓋。將瓶內(nèi)的培養(yǎng)基全部轉(zhuǎn)移至若干50 mL離心管內(nèi)，并清洗培養(yǎng)瓶內(nèi)壁一并收集。

④ 250g離心5min收集細胞沉淀，棄掉上清，使用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸至合適密度。接種至合適的培養(yǎng)器皿中，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

⑤ 培養(yǎng)24h后觀察細胞狀態(tài)和密度，按照常規(guī)方法進行傳代。

4.運輸方式：血清管

① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，有無破損漏液的情況，并核對細胞管上的標簽信息，細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。

② 收到細胞后請盡快進行實驗，如不能及時處理，請將細胞放至常溫環(huán)境，通常15-25℃為佳，并盡量在24h內(nèi)完成實驗。否則細胞狀態(tài)和存活率將會受到一定的影響。

③ 血清管懸液可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正?，F(xiàn)象，請放心操作。

④ 將血清管外壁進行常規(guī)消毒后，在超凈臺內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。

⑤ 吸取1mL 培養(yǎng)基清洗血清管內(nèi)壁，同樣轉(zhuǎn)移至15mL管，并吹打均勻。

⑥ 取20μL細胞懸液至EP管，臺盼藍染色并計數(shù)，記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系，如無臺盼藍，可略過該步驟。

⑦ 250g離心5min，收集細胞沉淀，并接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。

⑧ 24h后鏡下拍照并反饋我們，并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

5.運輸方式：“細胞膠囊”技術(shù)
①  “細胞膠囊”包括細胞管和Buffer共2個試劑管。請在收到細胞后，先檢查真空包裝袋內(nèi)的“細胞膠囊”管身是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，并核對管身上的標簽信息，細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。

②  收到“細胞膠囊”后請盡快進行實驗，如不能及時處理，請將細胞放至常溫環(huán)境，通常15-25℃為佳，并盡量在24 h內(nèi)完成實驗，否則細胞狀態(tài)和存活率將會受到一定的影響。“細胞膠囊”管內(nèi)的培養(yǎng)液可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正?，F(xiàn)象，請放心操作。

③ 用75%酒精消毒包裝袋表面，在超凈臺內(nèi)取出細胞膠囊管和Buffer管，小心的打開細胞膠囊管蓋，盡量避免氣泡溢出。 

④ 使用移液槍將細胞膠囊管中的培養(yǎng)液全部棄去。

⑤ 將Buffer全部加入到細胞膠囊管中，擰緊管蓋，上下顛倒3-5 min。

⑥ 觀察到細胞膠囊完全溶解后，小心開蓋，使用移液槍輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移到15 mL離心管內(nèi)。

⑦ 取20μL細胞懸液至EP管，臺盼藍染色并計數(shù)，記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系。

⑧ 250 g離心4 min，收集細胞沉淀，并接種到合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。

⑨ 24 h 后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，觀察細胞時請拍100×、200×各2-3張照片進行留存，所拍照片應(yīng)盡量清晰，并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

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