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LightNing-快速內(nèi)切酶-AscI酶

　LightNing? 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing? 快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne? 或 CutOne? Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。此外，百時美去磷酸化、連接試劑在 CutOne? Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切 - 修飾 - 連接”的體驗。

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產(chǎn)品介紹

限制性內(nèi)切酶 AscI

CutOne? Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。CutOne? Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

產(chǎn)品組成

組分	規(guī)格
LightNing? AscI	50 μl
10× CutOne? Buffer	1 ml
10× CutOne? Color Buffer	1 ml

特性和用法

快速內(nèi)切酶，可在5~15 min內(nèi)完成反應(yīng)

建議反應(yīng)條件

1× CutOne?緩沖液；

37℃溫育；

參照“DNA 快速酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

儲運條件

-20℃

常見問題總結(jié)：

1.為什么在CutOne? Buffer中加入HSA？

一些酶在反應(yīng)過程中需要HSA的參與，我們在CutOne? Buffer中添加了HSA，避免反應(yīng)中額外添加組分，使得酶切反應(yīng)更加便捷。

2.HSA的添加對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能會產(chǎn)生什么樣的影響？

在我們的測試中未曾發(fā)現(xiàn)HSA對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能有任何影響。在有些情況下，對于部分的酶切反應(yīng)有促進作用。

3. 為了保證酶量小于體系的1/10多酶切時往往可加入酶量較少，從而導(dǎo)致酶切不完全，如何解決？

說明書中給出的是最佳反應(yīng)體系，可以根據(jù)具體需求進行適當(dāng)調(diào)整。

酶切不完全的問題可以從這幾個方面進行解決：降低底物濃度，提高酶量同時擴大反應(yīng)體系，或者適當(dāng)延長反應(yīng)時間。

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