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MTT 細(xì)胞增殖檢測試劑盒- MTT Cell Proliferation Assay

MTT 細(xì)胞增殖檢測試劑盒作為高靈敏度成本低廉的細(xì)胞增殖檢測試劑，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等領(lǐng)域，它的特點(diǎn)是敏感度高、成本低廉。

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MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒

MTT Cell Proliferation Assay

MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒

貨號規(guī)格 BDXB0004 100次

保存：4℃避光保存，保質(zhì)期1年

MTT Cell Proliferation Assay 產(chǎn)品概述

MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，漢語化學(xué) 名為3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)，是一種黃顏色的染料。活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臢，用酶標(biāo)儀在500-600nm波長處測定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值（OD值）來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)（如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越?。?

MTT法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等領(lǐng)域，它的特點(diǎn)是敏感度高、成本低廉。它的缺點(diǎn)是需要使用有機(jī)溶劑，不僅是工作量增加，也會(huì)對實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。

MTT 細(xì)胞增殖檢測試劑盒組成

1. MTT試劑：10ml

2. 甲臢溶解液：100ml

需要自己準(zhǔn)備的材料

1. PBS（無菌）

2. 細(xì)胞培養(yǎng)基（無菌）

3. 96孔板（組織培養(yǎng)級，平底，無菌）

4. 倒置顯微鏡

5. 排槍

6. 細(xì)胞CO2培養(yǎng)箱

7. 酶標(biāo)儀（含650、570nm濾光片）

使用方法

1. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜〔煌瑪?shù)量的細(xì)胞進(jìn)行96孔板的鋪板（參考值：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入 100μl約2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100μl約5000個(gè)細(xì)胞。如有可能，最好先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定細(xì)胞鋪板的數(shù)量）。

2. 待細(xì)胞貼壁、生長恢復(fù)后，按照實(shí)驗(yàn)需要，給予不同濃度的藥物刺激等處理。

3. 每孔加入10μl的MTT試劑。（如果細(xì)胞培養(yǎng)基體積大于100μl，按比例調(diào)整加入MTT試劑的量）

4. 37℃孵育2-4hr。間或用顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)沉淀形成情況。

5. 當(dāng)顯微鏡下能看到明顯的紫色結(jié)晶沉淀時(shí)，每孔加入100μl甲臢溶解液（包括對照孔）。勿晃動(dòng)。

6. 室溫（18-24℃）避光放置至少2hr（最長可以過夜）。如果讀數(shù)偏低，并且紫色結(jié)晶溶解不完全，可以繼續(xù)放置。（通常室溫放置就足夠，但37℃有助于加速結(jié)晶的溶解）

7. 去蓋，將孔板放到酶標(biāo)儀中，在570nm（或介于550-600nm間的任意波長）測定OD值，參比波長650nm。

MTT 細(xì)胞增殖檢測試劑盒 注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)中必須設(shè)立陰性對照。空白孔的OD值應(yīng)該在0±0.1之間未處理細(xì)胞的OD值通常應(yīng)該在0.75-1.25之間

2. 陽性對照也應(yīng)該設(shè)

立。

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