人CD4 磁珠分選試劑盒 51-01-0001

人CD4磁珠分選試劑盒根據(jù)人細(xì)胞表面CD4表達(dá)從新鮮或冷凍的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)、白細(xì)胞分離產(chǎn)物或單細(xì)胞懸液中分離CD4+細(xì)胞。超順磁納米微珠表面用抗人CD4單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，形成磁性納米顆粒。預(yù)先偶聯(lián)到納米珠上的CD4抗體可以與細(xì)胞表面表達(dá)CD4的靶細(xì)胞結(jié)合。細(xì)胞/珠混合懸浮液被加載到分選柱上，當(dāng)使用分離緩沖液沖洗CD4細(xì)胞時(shí)，納米珠標(biāo)記的CD4+細(xì)胞被保留在柱內(nèi)，并在清洗步驟中富集。去除磁場后，目標(biāo)CD4+細(xì)胞可以很容易地從柱中洗脫。

基本信息

產(chǎn)品規(guī)格

貨號(hào)                   名稱                            規(guī)格               細(xì)胞量

51-01-0001S 人CD4+磁珠分選試劑盒 1mL      for up to 5 ×108 total cells

51-01-0001L 人CD4+磁珠分選試劑盒 2mL 1 mL    for up to 1 ×109 total   cells

產(chǎn)品應(yīng)用從白細(xì)胞分離、PBMC或細(xì)胞培養(yǎng)中富集或去除CD4+ T細(xì)胞。分離的CD4+ T細(xì)胞可用于培養(yǎng)和擴(kuò)增、流式細(xì)胞術(shù)、T細(xì)胞功能檢測等。

保存方式

保存于2-8°C。不可冷凍儲(chǔ)存?？煞€(wěn)定保存至標(biāo)簽上的有效期(EXP.)。產(chǎn)品形式：生物可降解基質(zhì)包被納米顆粒與抗cd4抗體提供的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，含有人血清白蛋白(HSA)，pH7.0-7.4

操作步驟

1. 材料準(zhǔn)備

 1.1 分選緩沖液（PBS溶液，pH 7.2，0.5%BSA and 2mM EDTA）

 1.2 緩沖液

 1.3 分離柱

 1.4 分選磁鐵

 2. 樣本制備

 當(dāng)使用抗凝外周血時(shí)，應(yīng)采用密度梯度離心法進(jìn)行分離，并使用分離緩沖液洗滌以去除干擾因子。

 當(dāng)使用冷凍的PBMC時(shí)，復(fù)蘇冷凍的PBMC，然后繼續(xù)執(zhí)行本方案。當(dāng)發(fā)現(xiàn)死亡細(xì)胞相當(dāng)多時(shí)，應(yīng)用密度梯度離心法去除死亡細(xì)胞，或在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞過夜，然后繼續(xù)執(zhí)行本方案。

 相關(guān)輔助產(chǎn)品

貨號(hào)               產(chǎn)品名                        規(guī)格

91-01-0001 人淋巴細(xì)胞分離液    200mL/瓶

91-01-0002 快速單個(gè)核細(xì)胞分離管    15mL/支，20支 /包，10包/箱

91-01-0003 快速單個(gè)核細(xì)胞分離管    50mL/支，10 支/包，10包/箱

詳細(xì)操作步驟請參考對應(yīng)的產(chǎn)品說明書。

 3. 磁性標(biāo)記

 3.1 將所需數(shù)量的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的試管中。

 3.2 細(xì)胞計(jì)數(shù).

 3.3 細(xì)胞懸液、300g、10min離心，棄上清。

 3.4 在每10?總細(xì)胞在80μL緩沖液中重懸單細(xì)胞懸液。

 注意：需要考慮死體積，如死體積已足80uL則不需要加緩沖液。

 3.5 每10?總細(xì)胞加入20μLCD4磁性微球。

 3.6 混勻細(xì)胞懸液和磁珠，在冰箱中孵育30分鐘(2-8°C)。

 注意：如需要鑒定純度、可在這個(gè)步驟完成以后進(jìn)行鑒定抗體孵育。

 3.7 洗滌，每10?細(xì)胞加入1-2mL緩沖液清洗細(xì)胞，300×g離心10分鐘。棄上清。

 3.8 使用分選緩沖液，重懸細(xì)胞懸液在500uL體系。

 4. 實(shí)驗(yàn)耗材分選柱準(zhǔn)備

注：以SophMag? xL Columns細(xì)胞分選柱為例（貨號(hào)：51-02-0009），其余規(guī)格分選柱所需試劑用量見產(chǎn)品說明書。

4.1 取一根全新的分選柱置于對應(yīng)配套的磁鐵中。

4.2 取1mL分選緩沖液緩慢加入分選柱中，潤濕分選柱內(nèi)部，期間避免氣泡產(chǎn)生和進(jìn)入分選柱內(nèi)部，直至分選柱后一滴液體流出。

4.3 在分選柱下放置新的試管，取操作步驟3準(zhǔn)備的細(xì)胞懸液，緩慢加入分選柱內(nèi)，等待細(xì)胞懸液后一滴流出。

4.4 取操作步驟4.3細(xì)胞懸液的試管加入3mL分選緩沖液，并充分混勻，然后加入分選柱內(nèi)，直至后一滴流出。

4.5 重復(fù)操作4.4操作3次。

4.6 后加入5mL分選緩沖液于分選柱內(nèi)，取出分選柱使用分選柱配套的活塞推出分選柱內(nèi)目的細(xì)胞于新的試管里面。

4.7 根據(jù)下游應(yīng)用對應(yīng)處理。如需鑒定純度需盡快完成。