天根 KR211 miRcute增強(qiáng)型miRNA DNA合成試劑盒
天根 KR211 miRcute增強(qiáng)型miRNA DNA合成試劑盒采用加A法來(lái)進(jìn)行miRNA cDNA的反轉(zhuǎn)錄。
本試劑盒采用了雙組分形式，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作流程，降低了操作失誤的可能性。
試劑盒中的miRNA RT Enzyme Mix包含了E.coli Poly(A) Polymerase、RTase和RNasin，其中的E.coli Poly(A) Polymerase不但具有高*效的加A尾效率，還可特異性識(shí)別單鏈 miRNA，避免了具有雙鏈結(jié)構(gòu)的miRNA前體的進(jìn)一步逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)；RTase經(jīng)過(guò)分子改造，去掉了RNase H活性，增加了RNA模板親和力，從而使得miRNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)具有較高的效率和靈敏度。
試劑盒中的2× miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA加A尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的所有原料和引物，并經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，可保證miRNA 3'末端的Poly(A)修飾過(guò)程和 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程同時(shí)高效進(jìn)行。
1. 省時(shí)省力。本試劑盒將miRNA的加A尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合二為一，在減少操作步驟的同時(shí)也節(jié)省了一半的反應(yīng)時(shí)間。另外，本試劑盒為雙組分形式，操作過(guò)程中只需加入RNA模板和兩個(gè)組分即可進(jìn)行miRNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，進(jìn)一步簡(jiǎn)化了操作。
2. 特異性強(qiáng)。本試劑盒中的E.coli Poly(A) Polymerase和RTase都只針對(duì)單鏈的miRNA進(jìn)行修飾和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，可避免具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的miRNA前體進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
3. 靈敏度高。本試劑盒通過(guò)將加A尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的整合，實(shí)現(xiàn)了miRNA的加A產(chǎn)物可全部進(jìn)行進(jìn)一步的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，大大提高了低豐度miRNA的檢出率。
4. 適用廣泛。本試劑盒可針對(duì)幾乎所有材料提取的miRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，模板的使用范圍可達(dá)20 pg-2 μg(質(zhì)量范圍)和10 fM-100 pM (濃度范圍)。
染料法/探針?lè)╩iRNA的熒光定量研究
本試劑盒須與miRcute Plus miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(FP411)配套使用
圖1. 使用TIANGEN miRcute增強(qiáng)型miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒(KR211)分別與國(guó)外知名Q公司(左)和國(guó)內(nèi)T公司(右)的同類產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄人類miRNA mimics mix，之后用熒光定量檢測(cè)
hsa-miR-133a-3p。結(jié)果顯示，對(duì)于同一RNA樣本，與競(jìng)品(藍(lán)色線)相比TIANGEN KR211(紅色線)反轉(zhuǎn)錄之后得到的cDNA量更大。KR211具有更高的反轉(zhuǎn)效率。miRNA mimics mix上樣量：2×108 copies；反轉(zhuǎn)錄體系：20 μl，取2 μl定量；定量試劑：TIANGEN miRcute增強(qiáng)型miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(SYBR Green)(FP411)；使用儀器：ABI 7500 fast。
圖2. 使用TIANGEN miRcute增強(qiáng)型miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒(KR211，上排)與國(guó)外知名Q公司(下排)的同類產(chǎn)品分別反轉(zhuǎn)錄人類Total RNA，之后 用熒光定量檢測(cè)hsa-miR-122-5p。結(jié)果顯示，對(duì)于同一RNA樣本，與競(jìng)品相比TIANGEN KR211具有更高的靈敏度和穩(wěn)定性，更適合下游實(shí)驗(yàn)。Human Huh7細(xì)胞Total RNA提取采用TRNzol Universal(DP424)。反轉(zhuǎn)錄上樣量：100 ng-1 pg；反轉(zhuǎn)錄體系：20 μl，取2 μl
定量；定量試劑：TIANGEN miRcute增強(qiáng)型miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(SYBR Green)(FP411)；使用儀器：ABI 7500 fast。 
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