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天根試劑盒- 高效植物基因組DNA提取試劑盒
產(chǎn)品介紹
天根試劑盒-高效植物基因組DNA提取試劑盒 采用可以DNA的離心吸附柱自配的裂解緩沖液系統(tǒng)，能夠高效提取多種不同植物組織中的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司新型材料， 高效吸附DNA，可有效去除雜質(zhì)蛋白。配套的裂解緩沖液可以高效裂解植物細胞，保護DNA的完整性，提高基因組DNA濃度。提取的基因組DNA片段大，純度得率高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構建、 Southern等實驗。
儲存條件
試劑置于室溫（15-30℃）干燥條件下可保存12個月；更長時間的保存可置于2-8℃。
使用中若產(chǎn)生沉淀，使用前應先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時間，必要 時可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀。
產(chǎn)品特點
請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。
2．緩沖液FGA可能發(fā)黃，并不影響提取效果。
3．若緩沖液FGA或LP2有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。
4．所有離心步驟均為使用臺式離心機，室溫下離心。
天根試劑盒-高效植物基因組DNA提取試劑盒說明書
使用前請先在緩沖液LP3和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。
1. 處理材料： 取植物新鮮組織100 mg或干重組織20 mg，加入液氮充分碾磨。加入400 μl緩沖液FGA和 6 μl RNase A（10 mg/ml），旋渦振蕩1 min，室溫放置10 min。
2. 加入130 μl緩沖液LP2，充分混勻，旋渦振蕩1 min。
3. 12,000 rpm（~13,400×g）離心5 min，將上清移至新的離心管中。
4. 加入1.5倍體積的緩沖液LP3(例如500 μl的濾液加750 μl緩沖液LP3) (使用前請先檢查是否 已加入無水乙醇)，立即充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）， 12,000 rpm（~13,400×g）離心30 sec，倒掉廢液，吸附柱CB3放入收集管中。
6. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW (使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
注意：如果吸附柱膜呈現(xiàn)綠色，向吸附柱CB3中加入500 μl無水乙醇，12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
7. 重復操作步驟6.
8. 將吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g) 離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù) 的酶反應(酶切、PCR等)實驗。
9. 將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩 沖液TB，室溫放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）離心2 min，將溶液收集到離心 管中。 注意：為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室溫放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min。洗脫緩沖液體積不應少于50 μl，體積過小 影響回收效率。
洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。若用ddH2O做洗脫液應保證其 pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA降解。
DNA濃度及純度檢測 得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。
回收 得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。
DNA應在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。
OD260/OD280比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會偏 低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。
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