產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 TIANSeq rRNA Depletion Kit (H/M/R) 采用特殊設(shè)計(jì)的DNA探針與核糖體RNA（rRNA）結(jié)合，利用Ribo RNase H降解DNA-rRNA雜交鏈中的rRNA，從而去除人、小鼠、大鼠 總RNA中的細(xì)胞質(zhì)核糖體RNA（28S、18S、5.8S、5S）和線(xiàn)粒體內(nèi)核糖體RNA（16S、 12S），保留信使RNA（mRNA）和其它非編碼RNA。 

  該試劑盒對(duì)于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有較好的rRNA去除效 果，所獲得的去除了rRNA的RNA樣本可用于mRNA和非編碼RNA高通量測(cè)序，可提高測(cè)序結(jié)果中有效數(shù)據(jù)比例，純化產(chǎn)物也可用于隨機(jī)引物cDNA合成或其它下游應(yīng)用。

 產(chǎn)品特點(diǎn)

•  樣本廣泛：適用于高質(zhì)量（完整）及部分降解（如FFPE）樣本中rRNA的去除。 
• 高效去除：有效去除95~99.9%的人/小鼠/大鼠的rRNA。
•  數(shù)據(jù)全面：保留了不完整mRNA和非編碼RNA信息，使轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)更加全面。 
• 快速評(píng)估：試劑盒中提供的引物可快速評(píng)估rRNA的去除效果。

 推薦使用的其他試劑 

1. 去除rRNA的RNA純化：TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307)。 

2. PCR檢測(cè)rRNA去除效率，F(xiàn)astKing RT Kit (With gDNase) (TIANGEN Cat#KR116), SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) (TIANGEN Cat#FP205) 。 

注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

 1. 操作過(guò)程請(qǐng)注意避免核酸樣品和產(chǎn)物之間的交叉污染。

 2. 請(qǐng)使用不含RNA酶或DNA酶的槍頭、離心管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

 3. 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)清潔操作臺(tái)，建議使用RNA酶及DNA酶清除試劑處理臺(tái)面。

    確保沒(méi)有 RNA酶和DNA酶的污染。

4. 瞬時(shí)離心，將樣品置于PCR儀中（啟用熱蓋99~105℃均可），按以下程序操作，總共耗 時(shí)約20 min。

 注意：必須慢速降溫(每秒降溫0.1℃)，使探針與rRNA充分結(jié)合。

四、RNA純化 

推薦使用磁珠純化產(chǎn)品TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307)，也可使 用Agencourt RNAClean XP (Beckman Coulter)。 

1. 渦旋振蕩混勻TIANSeq RNA Clean Beads，吸取110 μl （2.2倍體積） 至步驟三的50 μl RNA產(chǎn)物，用移液器吸吹混勻10次。 

2. 室溫靜置15 min，使RNA充分結(jié)合到磁珠上。

 3. 將樣品置于磁力架上5 min，待溶液澄清后，用移液器小心移除上清。

 4. 保持樣品始終處于磁力架上，加入200 μl新鮮配制的80%乙醇 （每次實(shí)驗(yàn)需要新鮮配 制，因?yàn)橐掖家讖目諝庵形账?，濃度降低影響?shí)驗(yàn)效果）漂洗磁珠 （不要吹散磁 珠） ，室溫孵育30 sec，小心移除上清。

 5. 重復(fù)步驟4進(jìn)行漂洗。

 6. 取出離心管短暫低速離心 (<2000 g, 10 sec) ，使液體收集至管底，將樣品放回磁力架， 用移液器小心棄去所有液體。

 7. 保持樣品始終處于磁力架上，開(kāi)蓋晾干磁珠3～5 min （不要過(guò)度干燥，否則可能降低 RNA回收率。洗脫應(yīng)當(dāng)在磁珠依然顯深棕色且光亮，而且所有可見(jiàn)液體已完全揮發(fā)時(shí)進(jìn) 行。若磁珠出現(xiàn)裂縫，則表示已過(guò)度干燥）。

 8. 將樣品從磁力架上取出，加入6.5 μl RNase-Free ddH2O ，用移液器吹打10次混勻磁珠， 室溫靜置2 min。

 注意：上述洗脫體積適用于TIANSeq RNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒NR102或NR103，如搭配其他 RNA建庫(kù)產(chǎn)品，請(qǐng)根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)選擇合適的洗脫體積。

 9. 在磁力架上靜置2 min，待溶液澄清后，不要觸動(dòng)磁珠，小心吸取5 μl上清 （可根據(jù)步驟8 選擇的實(shí)際洗脫體積進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整，盡量充分利用洗脫產(chǎn)物）至新的Nuclease-Free PCR 管。

 10. 洗脫樣品可立即用于RNA測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建或其他分析應(yīng)用，也可在-20℃保存過(guò)夜或 在-80℃保存30天。