熱門關(guān)鍵詞: CO2搖床 凝膠成像系統(tǒng) 細(xì)胞培養(yǎng)耗材 乳酸分析儀 發(fā)酵罐 Rainin移液槍 振蕩培養(yǎng)箱 生物反應(yīng)器
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1. 細(xì)胞表面標(biāo)記檢測(cè)服務(wù)
流式細(xì)胞術(shù)(FCM)已廣泛地應(yīng)用于基礎(chǔ)研究,并逐步進(jìn)入臨床檢測(cè),用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞表面的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析,可區(qū)別多種細(xì)胞。細(xì)胞表面標(biāo)記主要包括表面受體和表面抗原,對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記的檢測(cè)已廣泛用于基礎(chǔ)、臨床免疫學(xué)研究和患者免疫功能的測(cè)定,如對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記檢測(cè)。
2006年國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)(ISCT)規(guī)定了間充質(zhì)干細(xì)胞的低鑒定標(biāo)準(zhǔn):
基本條件下貼壁生長(zhǎng)
表達(dá)CD105、CD73、CD90,
不表達(dá)CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/ CD19、HLA-DR;
體外可以誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞。
采用細(xì)胞表面標(biāo)記抗體試劑盒對(duì)不同的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行流式鑒定。
圖1 Human MSC檢測(cè)指標(biāo)分別有CD105(+)、CD29(+)、CD73(+)、CD34(-)、CD45(-)、CD11b(-)、CD44(+)
2. 細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。通常使用細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒,如常見的Annexin V熒光雙染法,其檢測(cè)原理為:Annexin V/ Annexin A5為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員,以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細(xì)胞漿膜的內(nèi)層,但在凋亡早期,膜不對(duì)稱性喪失,PS易位至細(xì)胞表面。熒光標(biāo)記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合,表明該細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞。碘化丙啶(Propidium
Iodide, PI)染色液,碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,呈現(xiàn)紅色熒光。
圖2 活細(xì)胞比例約88.14%,凋亡早期細(xì)胞約1.68%,
凋亡晚期或壞死細(xì)胞約2.66%,裸核細(xì)胞約7.53%
3. 細(xì)胞周期檢測(cè)服務(wù)
碘化丙啶(Propidium,簡(jiǎn)稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測(cè)定,然后根據(jù)DNA含量的分布情況,可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后,假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2,正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA
fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片段在染色過(guò)程中丟失,因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強(qiáng)度小于1,在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,即凋亡細(xì)胞峰。
圖3 細(xì)胞周期擬合圖
Cas9X擁有自有流式檢測(cè)和流式分析分選平臺(tái),
可以為膜蛋白基因敲除的客戶提供膜蛋白流式檢測(cè)和細(xì)胞分選富集服務(wù)。
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