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細(xì)胞轉(zhuǎn)染-QuickShuttle-Enhanced-轉(zhuǎn)染試劑增強型

細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑 QuickShuttle-Enhanced 增強型

貨號：KX0110042 含量：0.8 ml

用途：（1）用于大多數(shù)哺乳動物貼壁細(xì)胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建；

（2）用于難轉(zhuǎn)哺乳動物細(xì)胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染-QuickShuttle-Enhanced-轉(zhuǎn)染試劑增強型

增強型轉(zhuǎn)染試劑

貨號：KX0110042

含量：0.8 ml

用途：

（1）用于大多數(shù)哺乳動物貼壁細(xì)胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建；

（2）用于難轉(zhuǎn)哺乳動物細(xì)胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。

注意事項：

1. 質(zhì)粒 DNA：請用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。

2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。

3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。

4. 以 24 孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實驗為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 1~2μg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5μl，請在正式實驗前根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基用報告基因進行優(yōu)化。

5. 如果實驗?zāi)康脑谟诤Y選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系，可在細(xì)胞傳代后尚未貼壁時直接進行轉(zhuǎn)染，從而可節(jié)省 18~24 小時的轉(zhuǎn)染前細(xì)胞培養(yǎng)時間。使用方法：

1. 轉(zhuǎn)染前 18~24 小時接種細(xì)胞到 24 孔細(xì)胞板中，每孔 5~10×104細(xì)胞，1ml 完全培養(yǎng)基。

備注：如果篩選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系，可以考慮簡化的實驗步驟，即在細(xì)胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉(zhuǎn)染，無需 18~24 小時的等候時間。

2. 將 1~2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。

備注：質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的最適用量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來優(yōu)化，但理論上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范圍。

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。

4. 將上述復(fù)合物直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕搖細(xì)胞板或用加樣器吸打混勻。

備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染。在極少情況下會出現(xiàn)貼壁細(xì)胞脫落現(xiàn)象，可先從待轉(zhuǎn)染細(xì)胞孔中吸取 500μl 培養(yǎng)基與轉(zhuǎn)染復(fù)合物預(yù)混后再加入細(xì)胞中。若在細(xì)胞瓶中進行轉(zhuǎn)染，直接加入到無細(xì)胞貼壁的對面或側(cè)面并搖勻即可。

5. 將細(xì)胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養(yǎng)。備注：無需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時補加血清或更換培養(yǎng) 基。

6. 24~72 小時后根據(jù)實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。

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