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懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑-?QuickShuttle-Superfast-快速轉(zhuǎn)染試劑?

用途：（1）用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞系的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建；

（2）用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物懸浮細(xì)胞系的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。

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懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑-QuickShuttle-Superfast 快速轉(zhuǎn)染試劑

QuickShuttle-Superfast 快速轉(zhuǎn)染試劑

貨號(hào)：KX0110043

含量：0.8 ml

用途：（1）用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞系的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建（立傳立轉(zhuǎn)）；

（2）用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物懸浮細(xì)胞系的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	產(chǎn)品用途
QuickShuttle-Basic	KX0110041	0.8ml	適用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞系，可用于原代細(xì)胞和二倍體細(xì)胞
QuickShuttle-Enhanced	KX0110042	0.8ml	適用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞系，專用于難轉(zhuǎn)細(xì)胞系
QuickShuttle-Superfast	KX0110043	0.8ml	細(xì)胞消化和轉(zhuǎn)染同時(shí)進(jìn)行，立傳立轉(zhuǎn)?？捎糜趹腋〖?xì)胞
QuickShuttle-293	KX0110044	0.8ml	專用于各種293細(xì)胞，立傳立轉(zhuǎn)
QuickShuttle-Hela	KX0110045	0.8ml	專用于Hela細(xì)胞，立傳立轉(zhuǎn)
QuickShuttle-BHK-21	KX0110046	0.8ml	專用于BHK-21細(xì)胞，立傳立轉(zhuǎn)

注意事項(xiàng)：

1. 質(zhì)粒 DNA：請(qǐng)用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。

2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過(guò)濾。

3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過(guò) DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測(cè)試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。

4. 以 24 孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 1~2μg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5μl，請(qǐng)?jiān)谡綄?shí)驗(yàn)前根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基用報(bào)告基因進(jìn)行優(yōu)化。

5. 對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞系，立傳立轉(zhuǎn)要求使用生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，即細(xì)胞生長(zhǎng)至 80-90%成片或剛長(zhǎng)滿。若使用生長(zhǎng)過(guò)老的細(xì)胞，將明顯影響立傳立轉(zhuǎn)的效率。

6. 本品不推薦用于貼壁性較差的貼壁細(xì)胞系，如各種 293 細(xì)胞等。

7. 本品對(duì)大多數(shù)哺乳動(dòng)物懸浮細(xì)胞系有一定轉(zhuǎn)染效率，可用于穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。

使用方法：

1. 將懸浮細(xì)胞或新鮮消化的貼壁細(xì)胞接種到 24 孔細(xì)胞板中，每孔 1~2×105細(xì)胞，1ml 完全培養(yǎng)基。

備注：可在生長(zhǎng)旺盛的貼壁細(xì)胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，無(wú)需 18~24 小時(shí)的等候時(shí)間。

2. 將 1~2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。備注：質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的最適用量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來(lái)優(yōu)化，但理論上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范圍。

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無(wú)需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時(shí)間。

4. 將上述復(fù)合物直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，用加樣器吸打混勻。

備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

5. 將細(xì)胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

備注：無(wú)需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時(shí)補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng) 基。

6. 24~72 小時(shí)后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。

備注：對(duì)于一些轉(zhuǎn)染效率高的細(xì)胞系如 BHK-21 等，可在轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

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