支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的 “隱形殺手”，因其體積微小（0.1-0.3 μm）、無細(xì)胞壁、形態(tài)多變，且難以通過常規(guī)顯微鏡觀察，常被科研人員忽視。然而，其對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)和研究的負(fù)面影響貫穿整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，甚至可能導(dǎo)致研究結(jié)論的不可靠性。以下從細(xì)胞生理、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、研究成本等維度解析其具體影響：

一、對(duì)細(xì)胞生理狀態(tài)的直接干擾

營養(yǎng)掠奪與代謝紊亂

  支原體通過表面受體競(jìng)爭(zhēng)性消耗培養(yǎng)基中的關(guān)鍵營養(yǎng)物質(zhì)，如精氨酸、葡萄糖、膽固醇等。例如：

精氨酸支原體（M. arginini）：特異性降解精氨酸，導(dǎo)致細(xì)胞蛋白合成受阻，DNA 復(fù)制中斷，最終引發(fā)細(xì)胞凋亡或停滯于 G1 期。

萊氏無膽甾原體（A. laidlawii）：依賴宿主細(xì)胞的膽固醇合成細(xì)胞膜，破壞細(xì)胞膜完整性，導(dǎo)致細(xì)胞滲漏或形態(tài)異常（如貼壁細(xì)胞變圓、懸浮細(xì)胞聚團(tuán)）。

毒性代謝產(chǎn)物積累

  支原體代謝產(chǎn)生氨、過氧化氫、超氧陰離子等有害物質(zhì)，可引發(fā)細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷 DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，降低細(xì)胞活性。例如，口腔支原體（M. orale）產(chǎn)生的過氧化氫會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi) ROS 水平升高，干擾信號(hào)通路（如 MAPK、NF-κB 通路）。

基因表達(dá)與表觀遺傳調(diào)控異常

  支原體感染可通過激活細(xì)胞應(yīng)激通路（如 p38 MAPK）或直接結(jié)合宿主細(xì)胞基因組，導(dǎo)致基因表達(dá)譜廣泛改變。研究表明，污染細(xì)胞中約 10%-20% 的基因表達(dá)水平發(fā)生顯著變化，涉及細(xì)胞周期調(diào)控、免疫相關(guān)基因（如 IL-6、TNF-α）及代謝酶基因，可能誤導(dǎo)轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

二、對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的系統(tǒng)性干擾

細(xì)胞功能研究的可靠性危機(jī)

細(xì)胞增殖與凋亡實(shí)驗(yàn)：支原體污染可能掩蓋藥物對(duì)細(xì)胞的真實(shí)作用。例如，某抗癌藥物的抑增殖效果可能因支原體消耗藥物成分或改變細(xì)胞代謝活性而被低估或高估。

病毒包裝與轉(zhuǎn)染效率：支原體吸附于細(xì)胞表面或整合到宿主基因組中，可能干擾病毒載體的結(jié)合與轉(zhuǎn)染，導(dǎo)致慢病毒、腺病毒包裝滴度下降，影響基因編輯（如 CRISPR-Cas9）實(shí)驗(yàn)的成功率。

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的偏差放大

PCR 與測(cè)序干擾：支原體基因組含有與人類或其他宿主細(xì)胞同源的序列（如 16S rRNA），可能導(dǎo)致 PCR 假陽性結(jié)果；污染的核酸酶還可能降解樣本 DNA/RNA，影響測(cè)序質(zhì)量。

蛋白質(zhì)分析誤導(dǎo)：支原體表達(dá)的表面蛋白可能與抗體非特異性結(jié)合，導(dǎo)致 Western blot 出現(xiàn)非特異性條帶，或 ELISA 實(shí)驗(yàn)背景值升高。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床前研究的風(fēng)險(xiǎn)

若將污染細(xì)胞用于動(dòng)物模型（如腫瘤移植、免疫重建小鼠），支原體可能引發(fā)動(dòng)物體內(nèi)炎癥反應(yīng)，干擾腫瘤生長動(dòng)力學(xué)或免疫指標(biāo)檢測(cè)，導(dǎo)致藥效評(píng)價(jià)失真，甚至違反實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范。

三、科研資源的隱性損耗

時(shí)間與成本的浪費(fèi)

  支原體污染具有隱蔽性，可在實(shí)驗(yàn)室中通過交叉污染擴(kuò)散至多個(gè)細(xì)胞系，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)重復(fù)率增加。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年因支原體污染導(dǎo)致的細(xì)胞系廢棄和實(shí)驗(yàn)重做損失超數(shù)億美元，尤其對(duì)依賴珍貴原代細(xì)胞或干細(xì)胞的研究（如 iPSC、類器官培養(yǎng)）打擊巨大。

數(shù)據(jù)可重復(fù)性危機(jī)

   污染細(xì)胞發(fā)表的研究結(jié)果可能無法被其他實(shí)驗(yàn)室復(fù)現(xiàn)，影響學(xué)術(shù)公信力。例如，2018 年某知名期刊要求作者投稿時(shí)必須提供支原體檢測(cè)報(bào)告，否則拒稿，凸顯污染問題對(duì)科研誠信的威脅。

四、如何應(yīng)對(duì)支原體污染？

鑒于支原體污染的嚴(yán)重性，預(yù)防與快速清除是關(guān)鍵：

1.定期檢測(cè)：使用 PCR 試劑盒、熒光染色（如 Hoechst 33258）或商業(yè)化檢測(cè)試劑盒（如 Lonza 支原體檢測(cè)試劑盒），每周對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行篩查。

2.源頭控制：新引入細(xì)胞系需隔離培養(yǎng)并檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)耗材（如移液槍、培養(yǎng)箱）定期消毒，避免交叉污染。

3.高效清除：若發(fā)現(xiàn)污染，可使用HyCyte?支原體清除試劑（含 MR1/MR2 雙組分），通過靶向抑制支原體能量代謝與 DNA 合成，在 2-3 個(gè)循環(huán)（約 21 天）內(nèi)徹底清除污染，且對(duì)細(xì)胞毒性極低，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)（如細(xì)胞測(cè)序、功能驗(yàn)證）。其操作簡(jiǎn)便（直接添加至培養(yǎng)基）、適用廣泛（覆蓋 85% 以上常見污染菌株），已成為實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)支原體污染的優(yōu)選方案。

支原體污染是細(xì)胞生物學(xué)研究的 “隱形殺手”，而蘇州阿爾法生物提供的 HyCyte?支原體清除試劑為 2025 年的前沿研究提供了可靠的解決方案。無論是細(xì)胞CRT、基因編輯還是類器官培養(yǎng)，HyCyte?的高效、安全和便捷性均能提升實(shí)驗(yàn)可靠性，加速科研成果轉(zhuǎn)化.

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